非小细胞肺癌OPN对TAM的功能调控研究

The role of tumour-associated macrophages (TAMs) in NSCLC is not clear because the data for NSCLC are contradictory. Although it has been reported that TAMs include two clones (M1 and M2) which inhibit and promote tumor progress respectively, there are no exact biomarkers to identify these clones effectively. OPN positive infiltrating TAMs were detected in 45% of patients with NSCLC when we studied the relationship between OPN and tumor metastasis in NSCLC. We found that patients with OPN positive infiltrating TAMs in tumor tissues were associated with distant metastasis and poor prognosis. However, there is no report to elucidate the biological functions of OPN positive infiltrating TAMs in NSCLC. So we hypothesize that OPN is a biomarker of TAMs wich promote tumor progress.In this study，we investigate the regulation of OPN in TAMs of NSCLC by a co-culture model in vitro, bone marrow transplantation model in OPN konckout nude mice, fluorescence labeling of bone marrow transplantation mode.

肿瘤间质中浸润的巨噬细胞（TAM）在非小细胞肺癌（NSCLC）侵袭转移中的作用尚存争议。不同研究的结果并不一致，甚至相反。尽管有报道提示TAM存在抑制和促进肿瘤发展两大亚群，然而如何鉴别这些亚群至今尚无有效的标记物。本课题组前期研究肿瘤细胞骨桥蛋白（OPN）与NSCLC转移关系时，发现约45%患者肿瘤间质中TAM也表达OPN，进一步分析显示这部分患者较OPN阴性TAM患者更容易出现远处转移，预后较差。OPN阳性TAM在NSCLC的生物学功能目前尚无报道。据此，我们推测OPN可能是促肿瘤TAM的生物标记物之一。为此，我们拟借助体外细胞共培养模型、OPN基因敲除裸鼠骨髓细胞移植模型、荧光标记骨髓移植模型等研究手段，探讨OPN对NSCLC间质TAM生物学功能的调控。

在肿瘤微环境的巨噬细胞（MΦ）称之为肿瘤相关巨噬细胞,后者与肿瘤细胞相互作用，促进肿瘤侵袭转移，在肝癌、壶腹癌发现骨桥蛋白（OPN）阳性的MΦ促进肿瘤侵袭转移，我们前期研究也发现非小细胞肺癌间质中存在OPN阳性MΦ，但是生物学意义尚不清楚。为此，我们首先体外A549细胞与OPN阳性MΦ共培养发现，后者可明显促进A549细胞的侵袭转移能力,抑制巨噬细胞OPN的表达，可明显消除MΦ这种促侵袭转移的能力，进一步动物实验采用尾静脉注射氯磷酸盐脂质体消除小鼠体内OPN阳性MΦ，结果显示实验组小鼠皮下肿瘤较对照组明显缩小。组织芯片检测159例非小细胞肺癌行根治性切除术后肿瘤OPN阳性MΦ的表达，结果显示在OPN阳性MΦ组，微血管密度明显高于OPN阴性MΦ组( p= 0.0273). OPN阳性MΦ可作为独立的预测预后因子(总生存，p = 0.017；无病生存，p < 0.001)，在I期非小细胞肺癌患者尤其具有预测价值。在OPN阳性MΦ组，6年的总生存和无病生存率分别是22.64% 和16.98%，明显差于OPN阴性MΦ组(50.00% 和39.62%)。OPN阳性MΦ可作为预测肿瘤复发转移和远期生存的独立预后因子。究竟肿瘤通过什么途径将巨噬细胞招募到肿瘤间质呢？很多研究显示CSF-1和IL-6扮演重要角色，IL-6可刺激MΦ表达OPN.而前期研究已经显示OPN阳性TAMs是一个独立的预测预后因素。用组织芯片和免疫组化的方法检测417例行根治性切除术后的NSCLC患者CSF-1，IL-6和CD68阳性MΦ的表达情况，结果显示肿瘤表达CSF-1和IL-6与间质浸润的TAMs明显相关(P< .001). CSF-1和IL-6对于预测预后具有明显意义，单纯CD68的数目并无预测价值。然而多因素分析显示CSF-1、IL-6和CD68共表达可作为极其显著的独立的预后因子(P < .05)，然而CSF-1和IL-6，IL-6和CD68以及CSF-1和CD68都不是独立的预后因子(P > .05). 5年生存率在CD68-和CSF-1+和IL-6+组的患者预后明显好于CD68+和CSF-1+和IL-6+组的患者(P < .05)。通过上述研究发现OPN在MΦ可促进NSCLCL的侵袭转移，而后者可能通过分泌IL-6和CSF-1招募并通过OPN活化MΦ，OPN阳性MΦ可作为未来潜在的治疗靶点。