基于化学发光高灵敏活菌原位快速检测新方法的研究

目前各种微生物快速检测技术依然存在一定的问题，尚未有一种方法能够真正达到检测速度快、检测准确率高并且检测限低的要求。本项目通过设计合成一系列新型的、稳定高效的、能够快速穿透细胞膜的化学发光探针- - 1,2-二氧环乙烷类分子伞，筛选对活细胞的胞内酶产生化学发光的最佳试剂体系，研究构建一种高灵敏微生物活菌快速检测的新方法。该方法直接采用活菌的胞内酶作为检测靶点，避免了外源性的生物残留物的影响；以化学发光作为胞内酶活性的检测信号，无需荧光激发从而降低本底干扰，提高检测的灵敏度。该研究有望提供一种适用于细菌、真菌和孢子等广谱活菌原位化学发光快速检测的新技术。

传统的微生物检测方法费时费力，难以满足不同情况下的检测要求，研究快速、准确、实时地检测活细胞的新方法具有重要的意义。本项目提出一种以活细胞体内的水解酶作为检测靶点、以化学发光作为检测信号的活细胞检测新方法，并进行了深入研究，获得了一系列研究成果。本项目首先成功打通1,2-二氧环乙烷类化学发光底物的合成路线，采用TiCl4-Zn试剂替代TiCl3-LiAlH4试剂作为McMurry酮酯偶联反应的还原剂，主产物的收率达到81％；合成了系列具有分子伞结构的1,2－二氧环乙烷类化学发光底物，并对其结构进行了表征；对酵母、大肠杆菌进行了化学发光检测，实验结果表明将活菌破碎以后，与双亲性的1,2－二氧环乙烷化学发光底物作用会产生明显的化学发光信号。