利用RMHR系统构建高效的拟南芥RNAi文库

RNA介导的基因沉默/RNA干扰（RNAi）可引起特异性的同源基因mRNA的降解，其在动物，植物，藻类以及真菌等多种真核生物的基因功能鉴定和基因工程中得到了广泛的应用。RNAi的构建方法中最常用的是两步法和Gateway的重组技术，但这些方法每次只能操作1个DNA片段，不能用于基因沉默文库（RNAi文库）的构建。如何构建RNAi文库是目前世界上共同面临的一个挑战，也是RNAi技术在大规模的功能基因组研究和应用中的一个瓶颈问题。为了解决这一难题，我们采用创新性的设计方案，创建了一个全新的高效RNAi文库构建系统，即滚环复制介导的发卡RNA构建系统 (RMHR)。. 本研究将在已有的研究基础上，对RMHR系统进行改造，建立一套完善的RMHR系统和技术平台，并利用该系统高效的把拟南芥的cDNA文库转化成高质量的拟南芥RNAi文库，使我国在RNAi文库构建和相关研究方面处于世界领先地位。

RNA介导的基因沉默/RNA干扰（RNAi）可引起特异性的同源基因mRNA的降解，其在动物，植物，藻类以及真菌等多种真核生物的基因功能鉴定和基因工程中得到了广泛的应用。RNAi的构建方法中最常用的是两步法和Gateway的重组技术，但这些方法每次只能操作1个DNA片段，不能用于基因沉默文库（RNAi文库）的构建。如何构建RNAi文库是目前世界上共同面临的一个挑战，也是RNAi技术在大规模的功能基因组研究和应用中的一个瓶颈问题。为了解决这一难题，本实验室采用创新性的设计方案，创建了一个全新的高效RNAi文库构建系统，即滚环复制介导的发卡RNA构建系统 (RMHR)。. 本项目在已有的研究基础上，通过对中间载体，植物表达载体，内含子序列，loop环等的改造设计完成了对RMHR系统的改造，建立了一套完善的RMHR系统和技术平台，并利用该系统高效的把拟南芥的cDNA文库转化成高质量的拟南芥RNAi文库，并通过大规模的拟南芥转化，初步创制了拟南芥的RNAi突变体库，使我国在RNAi文库构建和相关研究方面处于世界领先地位，同时也为大规模的功能基因组研究奠定了基础。