钙敏感受体在脓毒血症大鼠外周血淋巴细胞分泌细胞因子中的作用和机制

脓毒血症是感染引起的全身炎症反应，多种细胞因子参与其中，而细胞因子主要由活化的淋巴细胞分泌。钙敏感受体（CaSR）是G蛋白偶联受体。本课题组首次发现心肌组织有CaSR存在，并证实它参与心肌缺血/再灌注损伤、细胞凋亡的发生。但是，CaSR与淋巴细胞及脓毒血症的关系，迄今国内外尚无报道。在前期研究中，我们发现健康人外周血淋巴细胞有CaSR表达，活化的淋巴细胞CaSR表达量增加并影响细胞因子的释放。我们推测脓毒血症中淋巴细胞CaSR对细胞因子的分泌也有一定作用，并可能与NF-kB、MAPK、JAks/STAT、PLC-IP3等信号转导途径有关。为证实这一假说，我们将复制大鼠脓毒血症模型，采用分子生物学、ELISA等技术，观察脓毒血症大鼠外周血淋巴细胞CaSR的表达、CaSR活化对细胞因子分泌的影响及其信号转导通路。本课题将从新的视觉阐明脓毒血症的发病和发展机制，并为脓毒血症的防治提供新的靶点。

本课题利用盲肠结扎穿孔术(CLP) 制作了脓毒症大鼠模型；Western blot检测了钙敏感受体（CaSR）蛋白、通道蛋白、TRPCs蛋白在淋巴细胞中的表达，同时检测了CaSR激动剂及NF-κB和MAPK信号传导通路阻断剂对淋巴细胞上相关信号传导通路蛋白的影响；ELISA检测了CaSR活化及NF-κB和MAPK信号传导通路阻断剂对淋巴细胞分泌细胞因子的影响；流式细胞仪检测了淋巴细胞凋亡；激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察了脓毒血症大鼠淋巴细胞[Ca2+]i的变化。结果显示CaSR激动剂促进脓毒血症大鼠外周血淋巴细胞CaSR的表达； CaSR的活化促进淋巴细胞促炎因子（IL-6和TNF-α）和抑炎因子（IL-4和IL-10）的分泌，诱导淋巴细胞凋亡，此作用与NF-κB和MAPK信号传导通路有关。CaSR活化还可通过PLC-IP3传导通路促进细胞膜上的TRPC3和TRPC6通道蛋白的表达调节淋巴细胞的钙稳态。我们的实验结果证实了脓毒血症中淋巴细胞钙敏感受体对细胞因子的分泌有一定作用，并与NF-κB、MAPK、JAKs/STAT和PLC-IP3等信号转导途径有关的假说。本课题从另一视角阐明了脓毒血症的发展机制，为脓毒血症的防治提供新的方向。