中药筋脉通对糖尿病周围神经病变HO-1表达的影响

糖尿病周围神经病变（DPN）患病率高，是糖尿病患者致残致死的重要原因之一。氧化应激在DPN的发生发展中占重要作用，抗氧化治疗有助于DPN的防治，但目前临床抗氧化治疗效果不理想。血红素加氧酶-l（HO-l）是体内最重要的内源性抗氧化保护因子之一，对保护组织器官发挥重要的调节作用。目前国内外未见中医药干预HO-1保护DPN的研究。中药筋脉通胶囊用于治疗DPN十余年，疗效良好。本课题承接北京市自然科学基金项目"筋脉通对糖尿病周围神经病变氧化应激致细胞凋亡的影响"，拟从整体实验和细胞实验，研究DPN时神经细胞中HO-1及其代谢产物CO以及上游转录因子Nrf-2、下游氧化应激和凋亡事件的变化，探讨HO-1在DPN氧化应激致细胞凋亡中的作用；并以α-硫辛酸作为阳性对照药，进一步观察筋脉通干预后上述指标的变化，为临床应用筋脉通防治DPN提供理论基础和实验依据。

按照计划如期完成实验，并根据预算进行经费支出。整体实验：以链脲佐菌素（STZ）成功诱导糖尿病周围神经病变（DPN）大鼠模型，随机分为模型组、筋脉通小、中和大剂量组及硫辛酸组，并设对照组。成模后每天1次灌胃给药，持续12周。采用电子Von Frey仪检测机械痛阈值，免疫组化法及Rt-PCR检测神经组织（坐骨神经和背根神经节）中HO-1、Nrf-2、Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白及mRNA表达，并检测血浆一氧化碳血红蛋白(COHb)含量。观察到STZ-DM大鼠的机械痛阈值、血浆COHb含量以及神经组织中HO-1、Nrf-2、Bcl-2的蛋白及mRNA表达水平明显下降，而Bax和Caspase-3的蛋白及mRNA表达水平则显著上升（P<0.05或P<0.01）；中药筋脉通胶囊能够使糖尿病大鼠的机械痛阈值、血浆COHb含量、HO-1、Nrf-2、Bcl-2的蛋白及mRNA表达水平明显回升，使Bax和Caspase-3的蛋白及mRNA表达水平明显下降（P<0.05或P<0.01）；且在某些指标方面，筋脉通中剂量组的疗效显著优于硫辛酸组（P<0.05）。细胞实验：原代培养大鼠雪旺细胞（SCs）及背根神经节（DRG），制备筋脉通和硫辛酸含药血清。采用MTT法检测细胞增殖水平，激光扫描共焦显微镜及Rt-PCR检测细胞的HO-1、Nrf-2、Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白及mRNA表达，TUNEL法检测细胞凋亡，DCFH-DA检测细胞内ROS水平，比色法测定细胞培养上清液中COHb含量。观察到高糖对SCs和DRG具有抑制增殖，促使细胞凋亡，增强ROS与Bax、Caspase-3的蛋白及mRNA的表达，降低HO-1、Nrf-2、Bcl-2的蛋白及mRNA表达的作用（P<0.05或P<0.01）；筋脉通含药血清可减轻高糖对SCs及DRG的抑制增殖及促凋亡作用，降低ROS及Bax、Caspase-3的蛋白及mRNA表达，上调细胞HO-1、Nrf-2、Bcl-2的蛋白及mRNA表达（P<0.05或P<0.01），提高COHb含量，疗效与硫辛酸含药血清无显著差异（P>0.05）。该研究表明中药筋脉通胶囊可通过增强外周神经组织的Nrf2/HO-1/CO通路的抗氧化应激和抗凋亡作用，来改善糖尿病大鼠的周围神经痛。课题组目前已完成论著4篇、综述2篇，参加国内会议交流1次。