KIAA1199蛋白促进类风湿性关节炎疾病进程的机制研究

The excessive proliferation of synovial fibroblasts and pannus formation is crucial in RA disease process, angiogenesis inhibitors are widely used in clinical treatment of RA. We found that the expression of KIAA1199 was higher in serum, synovial fluid and synovium of RA patients and associated with disease activity by comparative proteomics, clinical samples validation and ROC curve analysis. Function research found that KIAA1199 promote FLS proliferation and angiogenesis by KIAA1199/PLXNB3/SEMA5A/CTGF pathways. So firstly KIAA1199 knockout DBA-1mice was set by CRISPR/Cas9, then CIA model was constructed to study the effect of KIAA1199 protein in RA disease processes. Laser confocal microscope was used to observe the subcellular localization of KIAA1199. Double fluorescent complementary technology and immunoprecipitation technology was used to verify the direct interaction between the pathway proteins, screening and identification transcription factors combined with KIAA1199 promoter to explore the transcriptional regulatory mechanism. To lay the foundation of KIAA1199 as a biomarker for clinical diagnosis and drug intervention targets.

滑膜成纤维细胞的过度增殖及血管翳的形成对类风湿性关节炎（RA）的疾病进程至关重要，以此作为干预靶点研发的血管生成抑制剂被广泛用于RA的临床治疗。申请人前期通过比较蛋白质组学，大量临床样本验证和ROC曲线分析发现KIAA1199蛋白在RA滑膜，滑液和血清均有不同程度高表达并与疾病活动性相关；功能研究发现其具有促进滑膜细胞增殖和血管生成作用。本项目拟着重通过构建胶原诱导的关节炎模型研究KIAA1199蛋白对RA关节损伤，免疫学改变及疾病进程的影响，构建KIAA1199基因敲除模型，观察表型变化，关节发育和损伤情况；探索KIAA1199/PLXNB3/SEMA5A/CTGF通路的作用机制；筛选和鉴定与KIAA1199启动子结合的转录因子探索其转录调控机制。本项目研究为KIAA1199作为生物标志物用于RA临床诊断及以其作为干预靶点研发新的抗风湿病药物打下坚实的理论基础。

类风湿性关节炎（RA）是一种迄今为止病因未明的慢性炎症性自身免疫性疾病，主要累及手、足小关节炎症，常伴有关节外器官受累，严重者可以导致关节畸形及功能丧失。项目完成人前期多组学发现KIAA1199蛋白在RA患者高表达并与疾病进程相关，有潜力成为RA诊疗标志物。相关成果发表在Arthritis and Rheumatology，Cell death and disease，Arthritis Research & Therapy等杂志上。本项目在此基础之上通过临床大样本ELISA实验进一步验证KIAA1199蛋白在RA病人及正常人群中血清，滑液及滑膜病例标本中的差异表达和相关性分析，明确KIAA1199可作为 RA临床诊断标志物，具有极高的诊断价值，且与LMW-HA呈正相关。另外，本项目成功制备KIAA1199抗体进行了小鼠体内实验，发现其显著改善胶原诱导的关节炎模型小鼠（CIA）的关节肿胀及炎性浸润情况，为KIAA1199作为临床药物干预靶点提供了充分的实验依据。同时，本项目应用免疫共沉淀联合LC-MS/MS技术成功筛选出KIAA1199相互作用蛋白ANXA1，明确△G8结构域是KIAA11199参与相互作用的主要结构域。成功构建KIAA1199敲基因小鼠的CIA模型，进而在体内研究KIAA1199蛋白对RA关节损伤，免疫学改变及疾病进程的影响以及KIAA1199介导透明质酸降解的具体作用机制。.本项目发表中科院2区以上SCI收录论文6篇，获得浙江省科技进步三等奖一项，获得国家自然科学基金和浙江省重点研发项目资助，申请发明专利2项，本项目研究将为KIAA1199作为生物标志物用于RA临床诊断及以其作为干预靶点研发新的抗风湿病药物打下坚实的理论基础。