一个新柘橙病毒属病毒的生物学、全基因组和种群遗传结构及分子变异研究

对引起植物病毒病害的病原进行系统的鉴定是制定病毒病防治策略的依据，而对植物病毒种群遗传结构和变异的研究是控制病毒病发生流行的理论基础。薯蓣褪绿坏死花叶病毒(YCNMV)是最近发现侵染云南盾叶薯蓣和小花盾叶薯蓣的一种新病毒。本项目在已经分离得到的4个YCNMV分离物，并已测了3' 端基因组序列的基础上，拟系统研究该病毒的生物学特性（包括寄主范围、致病性和蚜传特性等）；病毒粒子形态、细胞病理学特征；血清学关系；获得并解析该病毒的全基组序列，从而揭示该病毒的基因组结构，为柘橙病毒属(至今仍无全基因组序列)其它病毒全基因组序列研究提供参考；此外，将大量采集云南不同薯蓣栽培区病样，进一步测定该病毒的全基因组序列和CP基因序列，从而揭示该病毒的自然种群遗传结构及分子变异；同时，将建立一套盾叶薯蓣和小花盾叶薯蓣茎尖脱毒技术体系，为该病毒的防治提供技术支撑。

薯蓣褪绿坏死花叶病毒(Yam chlorotic necrotic mosaic virus, YCNMV)是在云南发现的一个Macluravirus 属暂定种。本项目在前期获得4个YCNMV分离物3′端基因组序列（包括部分Nib、完整CP和3′-UTR序列）的基础上开展了YCNMV的生物学特性、YCNMV全因组序列测定、CP基因的遗传多样性、CP基因原核表达载体的构建和多克隆抗体的制备及建立薯蓣茎尖组织培养快繁体系。.1. 在感病薯蓣叶片中能观察到线状病毒粒子，病毒粒子长630-650 nm，直径12.5-14 nm，具有风轮状内含体，但这种内含体较直，没有观察到Potyvirus属典型的风轮状内含体。.2. YCNMV机械接种薯蓣、本生烟、普通烟、心叶烟、三生烟、苋色藜和菎诺藜，在这些植物的新叶和老叶上没有观察到发病症状,同时，ELISA检测和透射电镜检测也没有检测到YCNMV。通过蚜虫接种这些植物也得到同样的结果。.3. YCNMV基因组RNA序列长8137 nt(不包括3’Poly(A)尾)，具有一个大的开放阅读框(ORF)，编码一个由2623个氨基酸组成的多聚蛋白。与Potyviridae科病毒成员相比，YCNMV 5缺乏P1基因。.4. 对24个YCNMV分离物的CP基因分析表明，YCNMV遗传多样性丰富，其中YCNMV16和YCNMV22分离物可能是Macluravirus 属的2个新种。.5. 构建了YCNMV CP基因的原核表达载体，制备的多克隆可用于检测薯蓣样品。.6. 建立了小花盾叶薯蓣的茎尖组织培养快繁体系。