系统性沉默组成型高表达HSPs探究日本血吸虫抗胁迫维自稳的应激机制

热休克蛋白（HSPs）超家族是应激胁迫反应体系最重要成员，在血吸虫抗胁迫维自稳作用中应扮演重要角色。本课题拟以日本血吸虫组成型高表达sHSP-SjP40（国家发明专利授权ZL 200310112186）、HSP90、HSP60、 HSP70为核心靶标，以MEGAscript RNAi kit合成dsRNA，对体外培养尾蚴、童虫、成虫和毛蚴进行RNAi，系统性沉默此4种HSP，观察在有无胁迫因子如温度、正常和感染动物血清、紫外致弱等处置情况下，HSPs在转录和蛋白质水平的改变，血吸虫抗胁迫应激能力评价，观察是否可实现又如何实现对血吸虫HSPs应激体系致以整体性致死性摧毁？旨在知晓其作用机制，终极目标期能系统性摧毁血吸虫HSPs系统，破坏血吸虫无时无刻不在的强大自稳调节能力，为以HSP核心靶蛋白或表位构建"鸡尾酒疫苗"新型配伍方案奠定前期工作基础，为血吸虫病及其它疾病疫苗研究探索新的途径。

HSPs超家族对生命体的抗应激胁迫作用一直是生命科学最为瞩目的研究热点，从维护生命体的自稳作用而言，HSPs超家族形成一个自成体系的调控网络，并在感染性疾病和肿瘤的防治研究中占有重要地位。对于血吸虫而言，HSPs同样在其生活史中占据重要的地位，在血吸虫抗胁迫维自稳得以繁衍生息的过程中的作用至关重要。本课题以日本血吸虫组成型高表达sHSP-Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90为核心靶标，以MEGAscript RNAi kit 合成dsRNA, 化学合成FAM荧光标记的siRNA, 成功建立了dsRNA浸泡法、dsRNA电转化法和siRNA电转化法，以进行sHSP-Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90在血吸虫生活史不同阶段的RNAi，结果：三种方法均能达到良好的干涉效应，Real time PCR 和Western blot 呈示在转录和蛋白质表达水平均呈明显下降，四种HSPs靶标分子间存在不同的协同反应，对虫体的生存状态和雌虫产卵等产生显著影响。四种HSPs靶标分子中高效特异的siRNA干涉小片段正在进一步的筛选中。本研究为下一步构建鸡尾酒式的HSPs-siRNA治疗体系和HSPs复合肽疫苗，以达成系统性摧毁日本血吸虫应激反应体系的远期目标，奠定了良好的科学基础。