日本血吸虫童虫体被表面蛋白质组研究

体被表面是血吸虫和宿主物质交换的场所，也是宿主免疫效应分子与虫体直接接触的界面，与血吸虫营养摄取、信号传导和免疫逃避等密切相关。体被表面蛋白，特别是不同发育时期童虫体被表面蛋白的改变对维持血吸虫在终末宿主体内寄生及完成其生活史至关重要。目前有关血吸虫体被表面蛋白的研究仅成虫有零星报道，缺乏系统、深入地分析。本研究拟用生物素链霉亲和素系统分离纯化血吸虫不同发育时期童虫及成虫体被表面蛋白，应用比较蛋白质组学和生物信息学技术系统分析其组成和变化，利用实时定量PCR技术和免疫荧光技术确定重要表面蛋白的表达状况与分布，采用RNAi技术等研究重要蛋白编码基因的生物学功能，运用分子免疫学技术、芯片技术等探讨蛋白的作用和调控机制。研究成果不仅对发现血吸虫与宿主相互作用的关键因子，深入了解日本血吸虫的生长发育机制有重要理论价值，还可为筛选抗血吸虫病疫苗候选分子和新药药靶提供新思路。

日本血吸虫病是一种危害严重的人畜共患寄生虫病。体被表面蛋白与血吸虫营养摄取、信号传导和免疫逃避等密切相关，对维持日本血吸虫在终末宿主体内的寄生生活和生长发育发挥了重要的作用。本研究应用生物素链霉亲和素系统分离纯化日本血吸虫8、11、14、17、20、23、26、29、32 和 42 天10个不同发育时期童虫和成虫及42天雌虫和雄虫的体被表面蛋白，利用毛细管反相高效液相色谱法（RP-HPLC）和串联质谱法对各期虫体体被表膜蛋白的组成和变化作进一步地分析，分别鉴定到 475、347、263、165、250、337、298、140、114、85、202 和 331 个体被蛋白，其中包括囊泡膜蛋白、烯醇酶、抱雌沟蛋白、硫氧还蛋白过氧化物酶等一批与血吸虫营养摄取、代谢、信号传导、应激或免疫逃避等相关的血吸虫体被蛋白。通过不同发育阶段虫体和雌雄虫体被蛋白的深入比较分析，从蛋白组学角度阐释了血吸虫免疫逃避的相关机制，为分析明确雌雄虫生理学上的差异及更好地理解雌雄虫相互作用和性成熟机制提供了重要的实验依据。在体被蛋白组学研究基础上，本研究克隆、表达了Sj Vamp2等15个日本血吸虫体被蛋白编码基因，利用实时定量PCR技术和免疫荧光技术确定了这些重要体被蛋白在不同发育阶段虫体的表达水平及组织分布。对一些重要蛋白的生物学功能进行了初步探讨。应用RNA干扰技术实验证实了日本血吸虫囊泡膜蛋SjVAMP2和表膜蛋白Sj0ST48的基因表达沉默影响了血吸虫的生长发育及产卵；表膜蛋白SjMF 和 SjDF 具有质膜修复功能；重组体被表膜蛋白SjIrV1具有钙结合特性。小鼠免疫实验显示rSj0ST48、rSjRAD23等多个重组体被蛋白可诱导较高抗血吸虫感染免疫保护作用和作为血吸虫病疫苗候选分子的潜力。在国内外学术期刊上发表科研论文31篇，其中SCI收录论文21篇。申报国家发明专利5个，获国家发明专利授权2个。培养博士、硕士研究生10名。研究成果为深入了解日本血吸虫的生长发育机制提供了实验依据，为筛选抗血吸虫病疫苗候选分子提供了新思路。