RNA干扰技术阻断CTGF表达对成骨细胞增殖、分化的影响

本研究以体外培养成骨细胞为研究对象：实时定量RT-PCR检测增殖分化不同阶段成骨细胞CTGF mRNA表达；Northern杂交和Western免疫印迹法证实雌二醇下调成骨细胞CTGF mRNA和蛋白质表达；针对CTGF基因设计siRNA，筛选最佳沉默效应的CTGF-siRNA；根据对应序列设计后连接pGE-1载体构建成CTGF-shRNA表达质粒并稳定转染成骨细胞，用改良的钙-钴法ALP染色，Van Gieson法1型胶原染色，0.1%茜素红矿化结节染色，实时RT-PCR和Western 免疫印迹法检测ALP、骨钙素和1型胶原表达以观察阻断CTGF表达对成骨细胞增殖、分化的影响，并检测CTGF、OPG、RANKL、MMP-1表达；以期阐明CTGF表达下调在雌激素防止骨丢失过程中的作用和地位，为深入探讨雌激素缺乏致绝经后骨质疏松症的发病机制提供新的研究方向和依据。