基于多靶点细胞膜微柱液相色谱技术的黄精相关复方药效物质及配伍机理研究

The method of cell membrane micro-column liquid chromatography was set up in the previous work. The method will be used in the investigation of the anti-diabetes material contented in Polygonati Rhizoma related formula- - - Sanhuang wasting-thirst decoction and its combination technology. The cell membrane of target tissues which are related to diabetes will be selected and fixed on the inner wall of micro-column. And multi-targets active compounds screening method with micro-column infinity liquid chromatography-mass spectrum analysis system will be set up. The system will be used to investigate the active compounds contented in Sanhuang wasting-thirst decoction. Using the method of receptor pharmacology, micro-column infinity chromatography mass spectrometry combination technology and traditional Chinese medicine compatibility theory, the compatibility mechanism of Sanhuang wasting-thirst decoction which is based on active constituent will be studied.

本课题采用前期研究已建立的细胞膜微柱液相色谱法对中药黄精相关复方- - -三黄消渴汤抗糖尿病药效物质及配伍机理进行研究。通过制备与糖尿病相关的多个靶组织的细胞膜微柱液相色谱，本课题拟建立多靶点筛选模式的微柱亲和液相色谱-质谱联用筛选分析系统；并采用该系统对三黄消渴汤进行拆方及复方配伍研究。通过受体药理学、微柱亲和色谱技术、质谱联用技术以及中医药复方配伍理论的学科交叉，诠释三黄消渴汤基于药效组分基础上的配伍机理。

本课题分别从微柱的制备以及各个靶点细胞膜的制备研究入手，建立新型细胞膜色谱。在研究过程中建立了胰岛素抵抗3T3-L1细胞萃取色谱、胰岛素抵抗HepG2细胞萃取色谱,以及胰岛细胞膜磁性微球微柱色谱等多种筛选中药药效物质的亲和色谱方法。. 在应用性研究中，本课题应用所建立的多个靶点新型细胞膜色谱方法结合质谱分析对黄精相关复方-三黄消渴汤进行拆方及复方配伍研究。通过受体药理学、亲和色谱及色谱质谱联用技术，结合中医复方配伍理论的学科交叉，诠释该复方基于药效组分基础上的配伍机理。课题组应用所建方法对该复方中药效物质的研究表明在该方中黄精、黄连起主导作用，配伍后可增强药效。药材黄连中含有的小檗碱等生物碱类成分可能作用于胰岛细胞，也可与黄精中含有的高异黄酮类成分共同增加细胞对胰岛素的敏感性。黄精含的甾体皂苷类成分可作用于巨噬细胞起到缓解炎症反应的作用。由于化合物结构类型不同、作用于细胞的靶点不同，从而使得该配伍组合可起到一定的减毒增效的作用。以所建立细胞膜色谱为先导分离药效物质进行的活性测试结果也印证了所建立的新型细胞膜色谱的分析结果。本研究不仅为中药药效物质的研究提供了新思路，也为黄精配伍提供了一定的依据。.