嗜盐古菌蛋白酶SptA的C端延伸区功能研究

嗜盐古菌具有向胞外分泌类枯草杆菌蛋白酶的能力，这类蛋白酶是研究嗜盐酶嗜盐机制的理想材料，也具备在低水介质（有机相）中合成短肽的能力，具有重要应用价值。嗜盐古菌类枯草芽孢杆菌蛋白酶具有C端延伸区，但由于重组酶稳定性差及表达系统的不稳定性等原因，对C端延伸区功能的研究受到阻碍。最近，我们发现来源于嗜盐古菌Natrinema sp. J7的蛋白酶SptA具有良好的稳定性，成功构建了该酶在嗜盐古菌和大肠杆菌中的稳定的重组表达系统，为深入研究并揭示嗜盐古菌蛋白酶的C端延伸区的功能提供了可能。本项目将在前期工作的基础上，构建多种针对C端延伸区的突变体以及嵌合体，比较分析突变体酶与野生酶的稳定性、活性和分泌特性等特征，确定嗜盐蛋白酶SptA的C端延伸区的功能，在理论上为阐明嗜盐酶适应机理提供新的证据，为开发该嗜盐蛋白酶肽类药物合成等方面的应用潜力奠定基础。