基于NF-κB通路的荔枝果皮原花青素抗动脉粥样硬化机制

项目前期研究结果表明荔枝果皮原花青素以自然界较少见的A型结构为主，动物实验发现其具有明显的抗动脉粥样硬化(AS)活性。而目前已报道的抗AS活性原花青素均为B型。为明确A型与B型抗AS作用机制的差异，本研究拟采用制备型正相－HPLC(NP-HPLC)技术分离制备不同聚合度(DP)的原花青素寡聚体组分，以对ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化抑制能力为活性跟踪指标，比较不同DP原花素的活性，并确定其主活性组分，采用NP-HPLC/MS、13C NMR等技术表征其化学结构；分析主活性组分对ox-LDL刺激的巨噬细胞内NF-κB转录活性的影响，探讨细胞内与炎症相关的细胞因子和ATP结合盒转运子A1、清道夫受体A等胆固醇吞噬、外流相关基因表达的变化，阐释以荔枝果皮为代表来源的A型原花青素抗AS作用的分子机制及其构效关系。研究结果将丰富原花青素抗AS理论基础，为荔枝的综合利用和功能食品开发提供科学依据。

项目前期研究结果表明荔枝果皮原花青素以自然界较少见的A型结构为主，动物实验发现其具有明显的抗动脉粥样硬化(AS)活性。而目前已报道的抗AS活性原花青素均为B型,关于A型原花青素的抗AS机制尚不清楚。.本项目通过分离鉴定荔枝果壳中主要的原花青素单体化合物，比较其对ox-LDL诱导的巨噬泡沫细胞形成以及泡沫细胞内胆固醇外流的影响，确定出原花青素A2活性最强。AS是一种慢性炎性疾病，血管壁细胞内NF-κB的活化及其引发的炎性改变在AS的发生中有重要作用。因此，本研究对原花青素A2抑制巨噬细胞内核因子NF-κB转录活化相关的抗炎作用机制进行了研究。主要发现如下： .建立了荔枝果壳原花青素的超高压辅助提取工艺技术，该方法与单纯乙醇浸提相比总原花青素提取率提高30.1％，各单体酚类化合物含量提高5.8-61.9％；从荔枝果壳中分离到双(8-表儿茶基)甲烷、原花青素A2、表儿茶素等7个原花青素单体化合物，采用NMR等波谱分析手段表征了其化学结构；比较了广东地区11个荔枝主栽品种果壳中主要原花青素单体组成、含量和细胞抗氧化等活性，明确了荔枝主栽品种果壳中主要的原花青素单体包括原花青素A2、表儿茶素、A型原花青素三聚体和原花青素B2；采用制备型HPLC分离到A型原花青素三聚体，鉴定了其化学结构，比较了荔枝果壳中原花青素A2等4种主要的原花青素化合物对巨噬细胞胆固醇摄入和外排的影响，发现原花青素A2抑制巨噬细胞泡沫化作用最强；确证了原花青素A2对LPS刺激的巨噬细胞内NF-κB活化的抑制作用，结合应用特异性NF-κB抑制剂Bay 11-7082，探明其通过抑制巨噬细胞内NF-κB活化，进而抑制IL-1β、MCP-1等与AS发生密切相关的炎性因子的表达，揭示出抑制血管细胞内的炎症反应可能是荔枝果壳原花青素抗AS作用的主要机制。在完成上述合同任务内容外，还对荔枝果壳不同储藏条件下其原花青素等酚类物质含量及活性的变化情况进行了分析，建立了减少荔枝果壳中原花青素等酚类活性成分损失的荔枝果壳储藏方法。.本研究共发表英文专著1章节，学术论文9篇，其中SCI论文6篇，申请发明专利3件，其中2件获发明专利权。本研究探明了荔枝果壳中原花青素类化合物的构成及不同品种的构成谱，阐明了以荔枝果皮为代表来源的A型原花青素抗AS作用的分子机制及其构效关系，研究结果为荔枝的综合利用和功能食品开发提供了科学依据。