基于谷氨酸代谢通路调控穴位埋线改善大鼠脑缺血再灌注后肢体痉挛的作用机制研究

It is an important problem to find an effective method to cure spasticity after Cerebral ischemia(CI), for the researchers of rehabilitation medcine. Our previous clinical practice found that limb spasticity after CI could be improved by catgut implanted at acupoints(CIA), and basic study showed that CIA increased the expression of GABAB, and decreased mGluR1, so as to improve spasm of rats with cerebral ischemia-reperfusion. But we do not have a clear idea about the specific mechanism. In this study, a limb spasticity rat model will be produced by middle cerebral artery occlusion, tested by ZeaLonga neurophysical impairment score, modified Ashworth muscle tone scale and electro-physiological cardiotokography to evaluate the model, and immunochemistry stainning, immunofluorescent stainning, Western blot and high performance liquid chromatography used to detect related index. So that this study will clarify whether the mechanism is that CIA regulates glutamate transportert and Glutamine Synthetase to make GABA and Glu keep balance to relieve spasm after CI, based on glutamate metabolic pathway.

寻找有效治疗脑缺血后肢体痉挛的方法是目前康复临床面临的一个重要问题。我课题组前期临床实践发现，穴位埋线可改善脑缺血后肢体痉挛；同时基础研究发现，穴位埋线可通过提高脑组织GABAB的表达、降低mGluR1的表达，来改善大鼠脑缺血再灌注后出现的肢体痉挛，对于其具体作用机制，我们不得而知。本研究拟通过大脑中动脉阻塞法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注后肢体痉挛模型，以穴位埋线为干预措施，采用神经功能缺损评分、肌张力测量评价穴位埋线对模型动物肌张力的影响；采用免疫组织化学染色法、免疫荧光染色法、Western Blot、高效液相色谱法等技术, 阐明穴位埋线是否基于谷氨酸代谢通路，通过调节谷氨酸转运体、谷氨酰胺合成酶促进谷氨酸和γ-氨基丁酸之间达到平衡状态，从而缓解脑缺血后肢体痉挛的作用机制。

脑卒中幸存者遗留有不同程度的功能障碍，其中痉挛是导致功能障碍的重要原因，严重影响了患者的生活质量。中医认为其病因病机主要为阳气虚弱、阴阳失调、筋脉失养。本课题组前期临床实践表明穴位埋线可平衡阴阳、调和气血、疏通经络，从而缓解脑卒中后肢体痉挛，并基础研究发现穴位埋线可通过提高脑组织GABAB的表达、降低mGluR1的表达，来改善大鼠脑缺血再灌注后出现的肢体痉挛。. 本课题主要从谷氨酸代谢通路的角度进行研究，制作大鼠脑缺血/再灌注后肢体痉挛模型，采用穴位埋线进行干预处理，通过采用免疫组织化学染色、RT-PCR、Western Blot、高效液相色谱荧光等分子生物学方法，观察谷氨酸转运体（GALST、GLT-1）、谷氨酰胺合成酶（GS）、Glu、GABA 的含量等。实验结果显示：穴位埋线可提高脑缺血再灌注后肢体痉挛大鼠脑组织中GALST、GLT-1、GS的表达，降低Glu含量，提高GABA含量，实现Glu和GABA两者之间的平衡，实现中枢神经系统中兴奋性神经递质和抑制性神经递质之间的平衡，从而缓解肌痉挛，这为深刻理解脑卒中后肢体痉挛的具体作用机制，以及中医药治疗痉挛提供了理论和实验依据，具有极其重要的意义。