IVF刺激方案相关高雌激素对胎盘滋养细胞紧密连接功能的影响和机制

The mechanism of pregnant complications related to Assisted Reproductive Technology (ART) is unclear. Super-physiological levels of estrogen along with multiple follicular development in IVF cycles has been considered closely related to adverse pregnancy outcomes. Tight junction factor is the differentially expressed gene between normal and ART placentae, which was identified by human cDNA microarray in our laboratory. We propose that high estrogen in IVF cycle may in turn affect placental tight junctions and trophoblast cell invasion, causing related complications. Our previous experiments have established the methods of trophoblast cells culture in vitro, and confirmed the expression of tight junction factor in trophoblasts by immunofluorescence. Also we have already achieved to assess tight junction function by both Transepithelial Resistance and Paracellular Permeability measurement. This study is to explore ①physiological and supra-physiological levels of estrogen on trophoblast cell tight junction and invasion ability ; ② by further promoting or inhibiting estrogen receptor and its downstream pathways to explore the impact and mechanisms of estrogen on trophoblast tight junction invasion ability. This study investigates the association of high level of estrogen in IVF cycle and adverse pregnancy outcomes, providing a new basis for optimizing ART procedure and improves ART security.

辅助生殖技术（ART）增加妊娠风险的机制尚不清楚。IVF周期中大剂量促排卵药物使用后多卵泡同时发育所产生的超生理剂量的雌激素水平被认为和ART不良妊娠结局密切相关。实验室前期研究发现ART来源胎盘紧密连接功能异常，由此推测IVF周期高雌激素可能通过胎盘紧密连接进而影响滋养细胞侵袭能力，引发相关妊娠合并症。前期实验室已建立滋养细胞体外培养模型，通过免疫荧光开展了滋养细胞紧密连接因子的表达和定位研究，并通过跨上皮电阻和细胞旁渗透性的测定实现了紧密连接功能的评估。本研究拟①探讨生理和超生理浓度雌激素对滋养细胞紧密连接功能及侵袭能力的影响；②通过进一步促进和抑制雌激素受体及其下游通路，探讨雌激素影响滋养细胞紧密连接功能及侵袭能力的可能机制。本研究探讨IVF超生理雌激素水平和不良妊娠结局关联，为优化ART条件、提高ART技术安全性提供新的依据。

辅助生殖技术(ART)增加妊娠风险的机制尚不清楚。IVF周期中大剂量促排卵药物使用后多卵泡同时发育所产生的超生理剂量的雌激素水平被认为和ART不良妊娠结局密切相关。实验室前期研究发现ART来源胎盘紧密连接功能异常，由此推测IVF周期高雌激素可能通过胎盘紧密连接进而影响滋养细胞侵袭能力，引发相关妊娠合并症。.项目按照研究计划正常开展。通过检测正常自然妊娠女性妊娠早期和足月分娩时外周血、绒毛组织或胎盘组织中雌二醇（E2）水平以及足月分娩时脐动脉血E2水平，发现正常自然妊娠的早期绒毛组织中含有高浓度的E2，足月分娩时胎盘组织中E2相对较低。利用不同浓度雌激素作用BeWo细胞一定时间后，分别通过测定细胞跨上皮电阻和细胞旁渗透性的改变，结果显示高水平雌激素可引起胎盘滋养层细胞紧密连接功能的破坏，提示ART促排产生的高雌激素水平可能会通过影响滋养层细胞间紧密连接结构影响胎盘功能。本项目利用不同浓度雌激素作用BeWo细胞一定时间后，细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变。并进一步检测基质金属蛋白酶2和9（MMP2、MMP9）的表达，结果显示高水平雌激素可以导致BeWo细胞侵袭功能受损，提示ART促排产生的高雌激素水平可能会影响滋养层细胞侵袭功能，导致胎盘功能异常，可能参与了妊娠期胎盘相关并发症的发生。. 本项目通过研究生理和超生理雌激素对胎盘紧密连接功能及侵袭能力的影响及相关机制具有重要意义，有利于降低由于IVF 超生理雌激素条件下移植后妊娠所带来的不良妊娠结局，为降低ART 相关妊娠风险、进一步优化ART 条件、提高ART 技术安全性提供新的依据。通过研究宫内不良妊娠环境对胎盘紧密连接功能及侵袭能力的影响，为胎源性疾病的研究提供新的思路。. 本项目在国际国内核心期刊发表论文4篇，其中SCI论文1篇，培养毕业硕士生1名，博士生1名。项目经费使用合理，符合要求。本项目完成了合同规定的研究内容和考核指标，符合校验要求。