血竭素调控成纤维细胞增殖和胶原分泌促进创伤修复的机制研究

Dragon's blood is a kind of Taditional Chinese Medicine which can bron muscle. Its major active ingredients is dracorhodin and it is flavone derivatives. The project used dracorhodin extracted and separated by SFE-CO2 extraction method to intervene fibroblast in rats wound granulation tissue checking regulatory role of fibroblasts on promoting wound repair. Experiment in vivo detected dracorhodin regulatory role of promoting fibroblast proliferation and collagen secretion metabolism, and elucidated the correlation between regulation and ERK1/2cell signal pathway. Experiment in vitro using ERK1/2 inhibitors, over expression of ERK1/2 gene and ERK1/2 gene sealing technology, detectedcorrelation between dracorhodin promoting fibroblast proliferation and ERK1/2 cell signal pathway, between regulation offibroblasts proliferation and expression of TGF- 1 and EGF, between regulation of fibroblast secreting collagenⅠand Ⅲ and matrix metalloproteinase (MMPs) associated with metabolic regulation and expression of matrix metalloproteinase inhibitor (TIMPs). We expounded regulation role of dracorhodin on fibroblast proliferation and collagenⅠand Ⅲ secretion and metabolism in this study in vitro. The project clarified dracorhodin promoting wound repair by regulating fibroblast proliferation and collagen I, III secretion and metabolism.

血竭为生肌类中药，其主要活性成分为血竭素，属黄酮类衍生物。本项目应用SFE-CO2萃取法提取的血竭素，通过干预大鼠创伤肉芽组织成纤维细胞，考察血竭素促进创伤修复对成纤维细胞的调控作用。体内试验考察血竭素对成纤维细胞增殖和胶原分泌及代谢调节的调控作用，阐明其调控作用与细胞信号通路ERK1/2相关性。体外试验利用ERK1/2抑制剂、ERK1/2基因过表达以及ERK1/2基因封闭等技术，考察血竭素促进成纤维细胞增殖与ERK1/2细胞信号通路相关性，调控成纤维细胞增殖与TGF-β1和EGF相关性，调控成纤维细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌和与其代谢调节有关的基质金属蛋白酶（MMPs）及基质金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）的表达相关性。通过体外研究阐明血竭素对成纤维细胞增殖和对Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌及代谢的调控作用。通过本项目研究，阐明血竭素促进创伤修复是通过调控成纤维细胞增殖及其分泌胶原代谢调节的作用机制。

创伤是兽医临床常发病，创伤发生后因动物无自我保护意识，易发生感染，影响动物的生产性能。中兽医药治疗创伤是传统兽医学留给我们的宝贵临床经验，血竭在传统兽医学治疗创伤的方剂中出现频次最多的一味中药。为了研究血竭促进创伤修复的分子机制，项目选取血竭素高氯酸盐作为研究对象，通过体内外试验，研究血竭素高氯酸盐调控成纤维细胞促进创伤修复机制。. 经过4年的实验研究，获得以下重要学术成果：. 1.血竭素高氯酸盐在伤口愈合前期，血竭素高氯酸盐可以抑制伤口的炎症反应，减弱伤口的炎性浸润情况，抑制相关炎性因子的分泌；可以促进微血管生成以及胶原蛋白的合成，可能是促进伤口愈合最为重要的因素；调控相关生长因子的表达来促进伤口愈合的速度。. 2.血竭素高氯酸盐可以显著促进成纤维细胞增殖，同时可以加速细胞迁移和上调细胞增殖指数。血竭素高氯酸盐可以优先识别并激活细胞表面 EGFR 靶点，进而激活下游通路ERK/CREB和PI3K/AKT/mTOR，共同调控细胞增殖。. 3.血竭素高氯酸盐可以提高大鼠伤口愈合组织中胶原蛋白Ⅰ型及胶原蛋白Ⅲ型的表达量。通过调控MMP-9及TIMP-1的活性来抑制胶原蛋白及细胞外基质的分解，并通过在伤口愈合各个阶段提高MMP-2及TIMP-2的表达以促进肉芽组织增生，加速伤口愈合。 . 经过4年的实验研究，获得以下关键数据：. 发表SCI收录的学术论文4篇，中文核心期刊学术论文2篇，培养研究生4名。. 本项目研究的科学意义在于揭示了血竭活性成分血竭素高氯酸盐促进创伤修复的机制是通过调控成纤维细胞表达的胶原蛋白及调控胶原代谢加速伤口愈合。研究结果不仅丰富了创伤修复过程中成纤维细胞发挥作用的分子机制，而且证明了血竭素高氯酸盐促进创伤修复是通过调控成纤维细胞增殖、迁移、分泌胶原蛋白和调控胶原代谢加速伤口愈合这一分子机制。本项目的研究，为天然药物活性成分治疗创伤修复提供理论依据，为今后开发天然药物治疗创伤修复提供参考。