从ERK、p38信号通路探讨枢经推拿对大鼠慢性神经病理性疼痛的影响及镇痛机制研究

Chronic pain is a disease that has been threatening human health for a long time. Due to the complexity of its pathological mechanism, it still lacks of effective and specific interventions. Recent years, intracellular signal transduction pathways have gained more and more attention in the study of chronic neuropathic pain. Certain study shows that the ERK, p38 signaling pathway is playing an important role in the development of neuropathic pain.. Former study has showed that there is an definite pain relief effect by Shu Meridian Tuina however its latent mechanism remains unclear. Based on the foundation of this and ERK, p38 signaling pathway, to study the effect of Shu Meridian Tuina on protein and gene expression of signal molecules Raf, ERK, CREB, MKP-1、p38 in the spinal cord swelling period of rats with chronic neuropathic pain using Western blot and Real-time PCR technique ，finally to reveal the potential analgesic mechanism of Shu Meridian Tuina on cellular and molecular level and provide scientific evidence for intervention of Shu Meridian Tuina on chronic neuropathic pain.

慢性疼痛是一种长期以来威胁着人类健康的病症，由于其病理机制的复杂性，目前缺乏有效及特异性的干预治疗手段。细胞内信号转导途径在研究慢性神经病理性疼痛方面受到越来越多的关注。研究表明ERK、p38信号通路对神经病理性疼痛的发生发展起着重要的作用。. 前期课题研究显示枢经推拿对缓解疼痛效果明确，但其潜在机制尚未清楚，因此本项目在此基础上，基于ERK、p38信号通路，应用Western blot和Real-time PCR等技术，观察枢经推拿对慢性神经病理性疼痛大鼠脊髓膨大段信号分子Raf、ERK 、CREB、 MKP-1、p38的蛋白及基因表达的影响，从细胞分子水平揭示枢经推拿镇痛的潜在作用机制，为枢经推拿干预慢性神经病理性疼痛提供科学依据。

背景：神经病理性疼痛是一种长期以来威胁着人类健康的病症，由于其病理机制的复杂性，对于神经病理性疼痛的机制及治疗的探讨始终研究的重点和难点。目前治疗神经病理性疼痛的疗法众多，但尚无一种得到公认的、疗效满意的、起效机制明确的镇痛疗法。推拿治疗疼痛在临床上疗效显著且无副作用，但其起效机制尚未明了，研究其机制可以为推拿镇痛提供科学依据。.主要研究内容：对96只SD大鼠进行两次随机分组，第一次随机分组:利用随机表法将大鼠随机分为正常组24只、假手术组24只、造模组48只;造模3、7天后，每组随机取6只大鼠进行行为学检测与取材;第二次随机分组:利用随机表法将造模组剩余大鼠36只，随机分为模型组、假推拿组和推拿组，每组12只，进行相应的处理。大鼠经7天预饲养后造模，造模3、7天后分别进行行为学检测和取材;造模7天后开始每日按干预方式所述，对每组大鼠进行不同干预，造模14天后进行第三次行为学检测和取材;造模21天后进行第四次行为学检测及取材。检测4个时间点各组大鼠的机械痛阈值和热痛阈值以明确推拿镇痛效果，采用PCR检测各组大鼠Raf、ERK、CREB、MKP-1、P38的基因表达情况，采用Western blot法检测各组大鼠Raf、ERK、CREB、MKP-1、P38的蛋白表达情况。.结果：在大鼠脊髓背角上，CCI组大鼠的Raf、ERK、CREB、P38均高于正常组和假手术组，MKP-1低于正常组和假手术组；推拿干预后推拿组的Raf、ERK、CREB、P38均低于CCI组和假推拿组，MKP-1高于CCI组和假推拿组；但在造模后第21天，各组大鼠间的Raf、ERK、CREB、MKP-1、P38差异无统计学意义。在大鼠大脑灰质顶叶区，各组大鼠间的Raf、ERK、CREB、MKP-1、P38差异无统计学意义。.意义：1、CCI模型可致神经病理性疼痛大鼠热痛阈、机械痛阈降低，推拿可提高CCI模型大鼠的热痛阈、机械痛阈。.2、P38、ERK信号通路参与了慢性神经病理性疼痛过程，推拿镇痛的机制可能与其下调脊髓背角中P38、ERK信号通路中的Raf-ERK-CREB、P38基因和蛋白的表达，上调MKP-1基因和蛋白的表达有关。