脊髓背角自噬对大鼠神经病理性疼痛的影响及枢经推拿的镇痛机制研究

The spinal dorsal horn is an important node of nerve conduction in neuropathic pain (NP). The latest research shows that autophagy is closely related to NP. Preliminary clinical and experimental results show that the pivot meridian massage has a good analgesic effect. We hypothesis that the pivot meridian massage may lead to autophagy in spinal dorsal horn, and then regulate inflammatory factor IL-1 beta and affect the apoptosis of neurons in the spinal dorsal horn, ultimately to block the transmission and maintenance of NP. This project will copy the SNL rat model, to observe the expression and changes of autophagy in spinal dorsal horn of the operation side in rats, to survey the effect of adjusting autophagy on neuropathic pain behavior in SNL rats and relations with levels varied on IL-1beta of spinal dorsal horn, to observe the relations between the threshold of pain and neuronal apoptosis in SNL rats through regulating autophagy, and to observe whether the pivot meridian massage will lead to autophagy. Through the above study, we intend to investigate the affect of autophagy in neuropathic pain to deepen our know to the pathogenesis of neuropathic pain. As well as to explore the mechanism of pain suppression by massage, finally provide the objective basis to the treatment of neuropathic pain by pivot meridian massage.

脊髓背角是神经病理性疼痛(NP)神经传导的重要节点。最新研究表明，自噬与NP密切相关。前期临床和实验表明枢经推拿具有较好的镇痛作用。我们假说枢经推拿可能引发脊髓背角自噬，进而调节脊髓背角炎性因子IL-1β和影响脊髓背角神经元凋亡最终达到阻断NP传导和维持的作用。本项目通过复制SNL大鼠模型：①观察术侧大鼠脊髓背角的自噬表达及变化情况；②观察调节自噬对SNL大鼠神经病理性疼痛行为学的影响，及与脊髓背角IL-1p水平变化之间的关系；③观察调节自噬对SNL大鼠痛阈与神经元凋亡的关系；④观察枢经推拿是否会引发自噬。通过上述研究探讨自噬在神经病理性疼痛中的作用，加深我们对神经病理性疼痛发病机制的认识，以及探讨枢经推拿抑制疼痛的机制，为枢经推拿治疗神经病理性疼痛提供客观依据。

背景：神经病理性疼痛是一种长期以来威胁着人类健康的病症，由于其病理机制的复杂性，对于神经病理性疼痛的机制及治疗的探讨始终研究的重点和难点。目前治疗神经病理性疼痛的疗法众多，但尚无一种得到公认的、疗效满意的、起效机制明确的镇痛疗法。推拿治疗疼痛在临床上疗效显著且无副作用，但其起效机制尚未明了，研究其机制可以为推拿镇痛提供科学依据。.主要研究内容：本项目通过复制SNL大鼠模型：①观察大鼠脊髓背角的自噬表达及变化情况；②观察调节自噬对SNL大鼠神经病理性疼痛行为学的影响，及与脊髓背角IL-1β水平变化之间的关系；③观察调节自噬对SNL大鼠痛阈与神经元凋亡的关系；④观察枢经推拿是否会引发自噬。.结果：①在脊神经结扎神经病理性疼痛模型大鼠脊髓背角自噬的变化中，模型组PWL和PWT显著性下降（P<0.05）。与同组不同时间点比较，模型组组内第7d天较之前显著性下降（P<0.05）。手术组大鼠脊髓背角P62、LC3蛋白的表达比较：术后第7d P62蛋白表达明显增高（P<0.05），LC3-Ⅱ蛋白明显下降（P<0.05）。在星形胶质细胞的特异性标记抗体GFAP和P62进行双重免疫荧光标记中：结果提示在空白对照组、假手术组及模型组术后第7天，脊髓背角P62阳性表达并未在星形胶质细胞呈共性表达，且模型组的P62阳性表达较高。②推拿对SNL大鼠脊髓背角自噬相关因子的影响及推拿的镇痛机制中：推拿组在造模后第5天PWL和PWT显著性提高（P＜0.05）。Western blot法检测建立模型7天后各组大鼠脊髓背角P62、LC3蛋白表达比较，结果提示：空白对照组、假手术组与模型组、雷帕霉素组、三甲基腺嘌呤组、推拿组大鼠之间P62和LC3蛋白的表达的差异有统计学意义（P＜0.05）。.意义：1.自噬跟神经病理性疼痛有关，当自噬发生时，脊髓背角P62及LC3的表达均抬高，且自噬与时间有相关性。2.星形胶质细胞未参与SNL模型7d内自噬反应过程。3.推拿可缓解神经病理性疼痛，其机制可能与上调自噬，抑制炎症反应，发挥镇痛作用有关。