CAMKⅡ信号转导途径在脾虚证躯体泛化效应中的作用及益气健脾法的干预研究

脾虚可导致多系统多脏腑功能紊乱，即"脾虚证躯体泛化效应"。基于细胞信号转导理论在研究脾虚证躯体泛化效应中的可能途径，本研究结合前期工作，建立"钙调素蛋白激酶Ⅱ（CAMKⅡ）信号转导途径在脾虚证躯体泛化效应中的可能作用"工作假说，以大鼠脾虚证模型为研究对象，采用PDE酶法、免疫印迹技术和实时荧光定量RT-PCR技术检测CAMKⅡ信号转导途径中Ca2+/ CaM-PK II活性与CaM mRNA在不同系统组织、不同时间点的动态表达规律，在此基础上进一步观察CaM-PK II表达变化与脑肠肽SS、GAS、MOT等之间的关系，并应用以益气健脾法为指导的四君子汤进行干预治疗，通过相关性分析，拟从CAMKⅡ信号途径关键分子角度揭示脾虚证躯体泛化效应的发生机制以及益气健脾法对其干预的作用机理和科学内涵，并为二次开发健脾类优势中成药的关键技术提供理论支撑。

本项目以中医脾虚证证候要素和病机演变特点为基础，结合临床研究提出“脾虚证躯体泛化效应”证候模式，并结合信号转导理论建立“Ca2+/ CaM-CaMKⅡ信号通路在脾虚证躯体泛化效应中的可能作用机制”工作假说，以脾虚证大鼠脑海马、小肠、胰腺、骨骼肌和肝组织Ca2+/ CaM-CaMKⅡ信号通路为研究重点，探讨了该信途径在“脾虚证躯体泛化效应”中的响应以及四君子汤干预效应，阐释“脾虚证躯体泛化效应”的发生机制。.研究结果：（1）脾气虚大鼠表现为一般生存状况较正常大鼠差，逐渐出现平均每日摄食量减少，体重增长缓慢、肛温降低且负重游泳耐力时间下降，脾虚证宏观证候积分升高；胃残留率升高而小肠推进率减低，血清D-木糖、空腹血糖、血清胰岛素水平下降；胃肠激素GAS、MOT、SS、VIP分泌紊乱，小肠、胰腺、骨骼肌、脑海马和肝组织SDH活性显著下降，LDH活性显著升高，提示脾虚证大鼠以上组织细胞能量代谢紊乱。（2）Ca2+/CaM-CaMKⅡ信号通路在脾虚证病程中存在表达差异，在小肠组织以高表达为主：[Ca2+]i浓度升高，CaM、CaMKⅡ基因和相关蛋白表达上调；而在胰腺、骨骼肌、肝脏、脑海马组织中该通路关键分子CaM、CaMKⅡ以低表达为主。（3）“脾虚证躯体泛化效应”的发生涉及机体糖代谢平衡紊乱，而且伴有小肠、胰腺、肝脏、脑海马和骨骼肌能量代谢紊乱，且Ca2+/CaM-CaMKⅡ信号通路关键分子在不同组织中存在差异表达。（4）四君子汤均能改善脾虚大鼠一般生存状态，延长游泳耐力时间，调节胃肠激素GAS、MOT、SS、VIP分泌和胃肠转运功能；提高脾虚大鼠空腹血糖、血清胰岛素水平及脑海马、小肠、胰腺、骨骼肌、肝组织能量代谢相关酶活性，调节脑海马、小肠、胰腺、骨骼肌、肝组织Ca2+/CaM-CaMKⅡ信号通路关键分子[Ca2+]i 、CaM、CaMKⅡ基因和相关蛋白正常表达，提示四君子汤可能通过Ca2+/CaM-CaMKⅡ信号通路的调节发挥治疗脾虚证病理过程的功效。