从“脾主思”探讨cAMP/PKA-CREB通路在脾气虚证大鼠脑肠区域中的交互响应及四君子汤干预效应

Traditional Chinese Medicine thinks that spleen governs transportation and transformation and is the source of qi-blood.It also holds that spleen governing ascending clear and in ambition for thoughts. The function of spleen refers to digestive and nervous system, and spleen deficiency induces a series of syndrome factors,such as transport delay, abdominal distension loose stools, insomnia forgetful and so on. According to prophase work and cAMP/PKA-CREB signaling pathway being related to the material energy metabolism and learning and memory, this project tries to make a working hypothesis of interactive response and sijunzi decoction intervention effect of cAMP/PKA-CREB signaling pathway in spleen-Qi deficiency rats brain-gut region.Therefore, as an object in spleen-Qi deficiency rats, in evaluating the gastrointestinal function and on the basis of learning-memory behavior, the study was designed to explore the difference of key molecules of cAMP/PKA-CREB signaling pathway, protein and phosphorylation-level of hippocampus and small intestine tissue during the course of the spleen-Qi deficiency by using molecular biology method. After using sijunzi decoction to intervene ,by correlation analysis, we intend to reveal the scientific connotation of spleen governing transportation and transformation and spleen in ambition for thoughts and mechanism of action of sijunzi decoction and to provide theoretical support for clinical application from the point of cAMP/PKA-CREB signaling pathway key molecules.

中医认为“脾主运化而为气血生化之源，脾主升清而在志为思”，故涉及消化与神经系统相关生理功能；脾虚则易出现纳呆少食、运化迟滞、腹胀便溏及神思萎顿、失眠健忘等证候要素。本课题依前期工作并结合与物质能量代谢、胃肠功能和学习记忆密切相关的cAMP/PKA-CREB信号通路，基于“脾主思”建立“cAMP/PKA-CREB通路在脾气虚证大鼠脑—肠区域中的交互响应及四君子汤干预效应”工作假说，以脾气虚大鼠为对象，在评估其胃肠功能、脑肠肽合成分泌以及学习记忆行为的基础上，采用分子生物学技术检测脾气虚病程中cAMP/PKA-CREB通路关键分子基因、蛋白及其磷酸化水平在脑海马、小肠组织中的差异表达，并应用四君子汤干预后，通过相关性分析，拟从脑海马、小肠组织cAMP/PKA-CREB通路关键分子角度揭示“脾主运化—在志为思”科学内涵及四君子汤的作用机制，为该理论和四君子汤的临床应用提供科学依据。

中医认为“脾主运化而为气血生化之源，脾主升清而在志为思”，涉及消化与神经系统相关生理功能；脾虚则易有纳呆少食、运化迟滞、腹胀便溏及神思萎顿、失眠健忘等证候要素。本课题依前期工作并结合与物质能量代谢、胃肠功能和学习记忆密切相关的cAMP/PKA-CREB信号通路，基于“脾主思”探讨“cAMP/PKA-CREB通路在脾气虚证大鼠脑肠区域中的交互响应及四君子汤干预效应。.研究表明：脾气虚模型组大鼠均出现体重增加量减缓、被毛稀疏枯槁、弓背抱团、排便稀溏等症状，脾虚宏观证候积分显著升高，且血清D-木糖含量显著降低；脾气虚大鼠在Morris水迷宫实验中逃避潜伏期显著升高，穿越平台次数显著降低；小肠及血清促胰液素含量显著降低，说明脾虚证病程中出现消化吸收功能和学习记忆功能的减退。.cAMP/PKA-CREB信号通路关键分子在脾虚证病程中存在以下变化：脾气虚模型组大鼠海马及小肠组织cAMP、PKA、CREB基因蛋白表达及其磷酸化水平显著降低，说明脾虚大鼠病程中存在脑肠区域cAMP/PKA-CREB信号通路关键分子低表达；而且脑肠区域Ghrelin蛋白表达以及P物质、抑胃肽含量均显著降低，说明脾虚证大鼠病程中存在脑肠肽的差异性表达。.经四君子汤治疗后，各干预组大鼠均一般生存状况均不同程度改善，且血清D-木糖含量均升高；各干预组大鼠在Morris水迷宫实验中逃避潜伏期降低，穿越平台次数增加；小肠及血清促胰液素含量升高；而病理提示各给药组大鼠海马CA1区细胞数目，排列以及形态结构均有明显改善，核仁基本明显，各给药组大鼠小肠组织腺体细胞数目，排列以及形态结构均有明显改善，绒毛长度不同程度增加，水肿不同程度缓解；说明四君子汤能够有效改善脾虚证大鼠的消化吸收功能和学习记忆功能。而各干预组大鼠海马及小肠组织cAMP、PKA、CREB基因蛋白表达及其磷酸化水平不同程度升高，说明各干预组大鼠脑肠区域cAMP/PKA-CREB信号通路关键分子高表达；而且脑肠区域Ghrelin蛋白表达以及P物质、抑胃肽含量均升高，说明各干预组大鼠脑肠肽的表达均得到改善。