A/H5N1 NS1蛋白抑制剂的高通量酵母荧光展示模型的研建及其形成与维持的分子机制研究

NS1是A型流感病毒H5N1的多功能非结构蛋白，通过蛋白-蛋白（NS1和宿主CPSF30、p85β等蛋白结合）和蛋白-RNA（NS1以二聚体的形式结合宿主dsRNA）两种作用方式，抑制宿主细胞的抗病毒系统，是重要的毒力因子。本项目拟以NS1-CPSF30,NS1-p85β和NS1-NS1结合位点为靶点，利用多色双分子荧光互补和酵母表面展示技术研建高通量酵母荧光模型用于筛选多靶点NS1抑制剂，并对模型形成和维持的分子机制进行研究。分子机制研究拟分三个阶段开展，首先，通过酵母展示技术，研究NS1、CPSF30和p85β与不同荧光蛋白之间的最佳融合方式；第二，研究将上述最佳融合蛋白整合到酵母基因组，进而展示在酵母表面的最佳重组方式；最后，研究以提高灵敏性为目的的高通量酵母荧光模型的优化方案。该高通量酵母荧光模型的研建成功，能有效推动抗A型流感病毒药物的研制，也能给其它病毒病药物的研制提供借鉴。

NS1 是A 型流感病毒H5N1 的多功能非结构蛋白，通过蛋白-蛋白（NS1 和宿主CPSF30、p85β等蛋白结合）和蛋白-RNA（NS1 以二聚体的形式结合宿主dsRNA）两种作用方式，抑制宿主细胞的抗病毒系统，是重要的毒力因子。本项目基于NS1和CPSF30以及NS1与p85β相结合的特点，利用双分子荧光互补技术分别构建了NS1蛋白与人CPSF30结合拮抗剂酵母荧光筛选模型以及NS1 与人p85β亚基结合拮抗剂酵母荧光模型两种模型，并利用这两种模型进行了药物筛选，结果表明，若干种中药具有抑制NS1和CPSF30以及NS1与p85β相结合的活性，从而为将来利用该模型进一步筛选抗病毒药物奠定了基础。