何首乌蒽醌类成分降血脂和抗动脉粥样硬化作用机制研究

本课题以传统的补肝肾、益精血的贵州道地药材何首乌中的游离蒽醌为研究对象，以血管平滑肌细胞为切入点，结合载脂蛋白基因缺陷（ApoE-/-）小鼠模型，系统研究何首乌游离蒽醌对高脂血症和动脉粥样硬化(AS)的影响。通过考察何首乌的炮制工艺、游离蒽醌有效部位化合物组成，以及离体细胞活性筛选，明确何首乌游离蒽醌抑制血管平滑肌细胞增殖的物质基础。通过研究有效部位、有效成分及组分配比，观察其对载脂蛋白基因缺陷小鼠诱发的高脂血症中血脂和C-反应蛋白水平变化、冠状动脉斑块的稳定性及病理学改变，评价何首乌游离蒽醌降血脂及抗AS的作用。结合现代细胞培养、分子生物学及蛋白质的显微共定位技术，深入研究其对组织蛋白酶及其抑制剂胱抑素C作用靶点的影响，阐明何首乌作为防治高脂血症及控制AS的候选药物的作用机制，为实现地方资源的有效利用、疾病的防治提供新的理论和实验依据，具有重要的理论意义和新药研究指导价值。

1.项目背景.动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种临床上较常见的动脉血管病变，是动脉管壁增厚、变硬，失去弹性和管腔狭小的退行性和增生性病变的总称。AS的病因病机较为复杂，大量研究表明，高脂血症是造成AS的重要原因之一。高脂血症主要是指血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL－C）水平过高和（或）高密度脂蛋白（HDL－C）水平过低的现象。随着现代社会的发展，心脑血管疾病已成为威胁我国城乡居民生命的头号隐患。.何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorumthunb的干燥块根。性味苦；甘；涩；性微温，归肝、肾经；依据炮制方法的不同，又有生首乌与制首乌之分。制首乌具有补肝肾、益精血、壮筋骨、乌须发之效。现代研究表明，何首乌主要含有蒽醌、二苯乙烯苷、磷脂等成分，具有降血脂、延缓动脉粥样硬化、抗衰老、提高免疫力、益智等作用。研究制首乌游离蒽醌提取物对于高脂血症及AS的治疗作用及其机制对于抗AS药物及降血脂药物的开发应用具有重要意义。.2.主要研究内容 . 优化何首乌的炮制方法，以兔平滑肌细胞和SD大鼠、昆明小鼠、新西兰大白兔等动物为实验对象，验证制首乌游离蒽醌提取物的降血脂及抗AS效果并探究其可能机制。.3.重要结果. 制首乌游离蒽醌提取物毒性低，且具有良好的降血脂及抗AS效果。.4.关键数据及其科学意义.炮制何首乌时，当黑豆汁用量为15倍、焖润时间为8 h、蒸制时间为48 h时，制首乌中大黄素和大黄素甲醚的总含量最高；.制首乌游离蒽醌提取物对昆明小鼠的LD50大于8000mg•kg-1 ；.经过对制首乌有效成分配方的筛选，优选配比方案为大黄素0.8g•kg-1芦荟大黄素0.04g•kg-1；.制首乌游离蒽醌提取物在较低浓度（3.75-15mg•kg-1）时即能对兔AS产生治疗作用；.大黄素能够升高兔平滑肌细胞中Cat D和Cat K的表达量，且当大黄素浓度为0.15mmol/L时Cat D的表达量最高，当大黄素浓度为0.1mmol/L时，Cat K的表达量最高；.意义：制首乌游离蒽醌提取物毒性低、对AS及高脂血症治疗效果好，是一种适合于开发成为降血脂及抗AS药物的中药提取物。