猪水泡病病毒主要抗原蛋白基因的克隆与表达产物的检测

本研究以我国猪水泡病病毒（SVDV）为材料，依据国外序列设计并合成了8对环核苷酸引物。首先：建立了SVDV的RT-PCR诊断方法，该法比目前最灵敏的乳鼠接种法灵敏100倍，比细胞接种法敏感1580倍，特异性较好，为进一步临床检测奠定了基础。次其：采用RT-PCR扩增克隆了结构蛋白的VP4，VP2的编码基因，并对VP4的全部67个氨基酸编码碱基进行了测定。第三；采用RT-PCR，套式PCR扩增克隆SVDV主要保护性抗原蛋白VP3，VP1的编码基因，进行了限制性内切酶谱分析和全部521个氨基酸的编码核苷酸序列的测定。同国外毒株比较分析，明确了我国分离毒株和国外毒株的关系及其分子生物学特性。最后，将VP3VP1克隆至表达质粒，在大肠杆菌中进行了表达和血清学测定。