利用双功能螯合剂DOTA构建通用型CAR T细胞用于实体瘤治疗的研究

Chimeric antigen receptor - modified T cells (CAR T cells ) therapy currently confronted a series of problems such as limited antigen recognition, fixed response activity and high cost, especially for the application in solid tumors. We intend to use the bifunctional chelator DOTA to be coupled with a specific monoclonal antibody as an intermediate bispecific targeting ligand, and to construct CAR with the DOTA-specific scFv as an extracellular domain, so as to design a DOTA-specific universal CAR T cells therapy. This study will demonstrate the ability of DOTA-specific CAR T cells to kill multiple tumor cells in vitro, and to explore various ways of regulating CAR T cells activity; further, we will validate the antitumor effect of DOTA-specific CAR T cells therapy in animal models and also evaluate the function of 68Ga-DOTA labeled antibody for PET imaging. Previously, we have successfully constructed the DOTA-specific CAR T cells and verified its anti-tumor efficiency in vitro. Further study will provide new strategies for improving the flexibility, safety and controllability of CAR T therapy, also provide new ideas for the integration of cancer diagnosis and treatment and individualized precision medicine, which we believe has important scientific value and clinical significance.

CAR T细胞治疗目前存在着抗原识别局限、活性难以调控、生产成本较高等问题，尤其是在实体瘤的应用中有着更严峻的挑战。我们拟利用放射免疫治疗中广泛应用的双功能螯合剂DOTA与特异性单抗偶联作为中间双特异性配体，利用DOTA特异性scFv作为胞外域构建CAR，开发一种DOTA特异性的通用型CAR T细胞疗法。本课题拟在体外实验中验证DOTA特异性CAR T细胞杀伤不同抗原表达谱的肿瘤细胞的能力，并重点探究多样化调控CAR T细胞活性的方式；在动物模型中验证DOTA特异性CAR T细胞的抗肿瘤作用并评价68Ga-DOTA-单抗在PET显像中的应用。课题组前期已成功构建了DOTA特异性的CAR T细胞并在体外实验中初步验证了其杀伤肿瘤细胞的作用。进一步完成此研究将为改善CAR T疗法灵活性、安全性和可控性提供新的策略，并为肿瘤的诊疗一体化及个体化精准医疗提供新的思路，具有重要的科学价值和临床意义。

CAR T细胞治疗目前存在着抗原识别局限、活性难以调控、生产成本较高等一系列问题，尤其是在实体瘤的应用中有着更严峻的挑战。我们利用放射免疫治疗中广泛应用的双功能螯合剂DOTA与特异性单抗偶联作为中间转接子，利用DOTA特异性scFv作为胞外域构建CAR，成功构建了DOTA特异性的通用型CAR T细胞。在体外实验中证实了DOTA特异性CAR T细胞杀伤不同抗原表达谱的肿瘤细胞的能力，并证明了调节DOTA-mAb的剂量能够实现调节DOTA CAR T细胞活性，从而为改善CAR T疗法整体的灵活性、安全性和可控性提供新的策略。.肿瘤微环境中免疫抑制细胞的浸润诱导了结直肠癌的进展及其对免疫治疗的耐药性。识别能够调节抑制性免疫细胞浸润的肿瘤特异性因子将为结直肠癌免疫治疗提供潜在的新靶点。免疫球蛋白样转录子ILT5是髓系细胞的负性调控因子，其在实体肿瘤中的表达和功能尚不清楚。我们的研究结果提示ILT5在人结直肠癌组织和细胞系中均较邻近正常组织细胞中表达水平更高，而肿瘤细胞中ILT5的富集与更晚的肿瘤分期和更差的生存期相关。进一步的体内外实验结果显示，肿瘤来源的ILT5可以抑制T细胞的浸润，并诱导肿瘤相关巨噬细胞的M2样极化，造成抑制性肿瘤免疫微环境。抑制肿瘤来源的ILT5可逆转免疫抑制性TME并限制结直肠癌的生长和进展。我们的研究结果首次发现了ILT5在实体肿瘤细胞中的表达，并提出可以将ILT5作为结直肠癌潜在的免疫靶点和预后标志物。