FMNL2相互作用miRNAs的筛选、鉴定及在结直肠癌侵袭、转移中的机制探讨

miRNA通过靶基因调控肿瘤的发生发展是目前肿瘤研究的热点。前期研究显示FMNL2促进结直肠癌的侵袭和转移，利用软件预测出10个与FMNL2相作用的miRNAs并进行部分表达筛选，提出miRNA可能影响RhoC/Pyk2/FAK通路的设想。本研究拟进行10种miRNAs的初步表达筛选；检测筛选出的miRNAs与FMNL2在结直肠癌细胞、组织中的表达及相关分析；利用荧光素酶报告系统确认与FMNL2直接作用的靶点miRNAs；分别转染靶点miRNAs、miRNAs inhibitor及共转染靶点miRNAs和FMNL2不含3'UTR的编码区表达载体，观察对结直肠癌体内外侵袭、转移的影响；检测FMNL2在RhoC/Pyk2/FAK通路中的作用，确认其作用环节；最后检测靶点miRNA对该通路的影响。旨在揭示调控FMNL2的miRNA网络及其参与的信号通路，为结直肠癌转移的诊治、药物筛选提供新靶点。

本研究揭示了调控FMNL2的miRNA网络及其参与结直肠癌侵袭和转移的分子机制。首先观察了筛选出的miRNAs与FMNL2在结直肠癌细胞和组织中的表达相关性，确认与FMNL2直接作用的靶点miRNAs，随后观察靶点miRNAs、miRNAs inhibitors及miRNAs/FMNL2（不含3’UTR）对结直肠癌侵袭和转移的影响，最后检测miRNAs通过FMNL2调控结直肠癌转移的信号机制。结果显示miR-206、miR-145、miR-34a、miR-137在结直肠癌细胞和组织中的表达与FMNL2呈负相关，荧光素酶报告实验进一步证实了FMNL2是miR-206、miR-34a、miR-145、miR-137的靶基因，miR-206、miR-34a、miR-145、miR-137均能下调FMNL2蛋白。功能实验结果显示miR-137在转录因子HMGA1调控下，通过靶基因FMNL2抑制结直肠癌侵袭和转移；此外，miR-206、miR-145和miR-34a分别通过FMNL2抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭能力。最后，miR-137能抑制FMNL2对PI3K/Akt、MAPK/ERK、RhoC/Pyk2/FAK通路的活化作用，进而抑制结直肠癌侵袭。本研究阐明了FMNL2参与结直肠癌侵袭和转移的新机制，并为结直肠癌转移的诊治、药物筛选提供了新的靶点。