ANXA1通过甲酰肽受体介导F-actin重排促进肿瘤侵袭转移的机制研究

The studies shows that ANXA1 may be regulate F-actin reorganization by activation of nFPRs to promote tumor cell invasion and metastasis. The project intends to build ANXA1-siRNA cell lines and detect the effect of ANXA1 and nFPRs on F-actin in the tumor cell with flow cytometry, Western Blot, and fluorescence microscopy; To detect the effect of ANXA1 and nFPRs by F-actin reorganization on migration and invasion of tumor cells. To investigate the possible functions and mechanism of ANXA1 enhanced cell migration and invasion through F-actin reorganization mediated by nFPRs. The research has opened a new way for exploring mechanism of tumorigenesis and metastasis, but also provide a theoretical basis for the clinical design of anti-tumor therapy.

研究表明膜联蛋白A1（ANXA1）可能通过激活功能性甲酰肽受体（nFPRs）调节丝状肌动蛋白（F-actin）骨架重排促进肿瘤细胞的侵袭与转移。本项目拟构建ANXA1-RNAi细胞系与FPR-RNAi细胞系，利用流式细胞术、Western Blot、荧光显微镜等技术方法检测ANXA1通过nFPRs影响肿瘤细胞中F-actin含量与形态；采用Transwell迁移侵袭实验检测ANXA1、nFPRs介导F-actin重排影响肿瘤细胞的迁移侵袭，探讨ANXA1通过nFPRs介导F-actin的重排参与肿瘤细胞的迁移与侵袭的机制，为探索肿瘤发生及转移机制开辟一条新的研究途径，也为临床设计抗肿瘤转移的信号转导治疗提供理论依据。

研究表明膜联蛋白A1（ANXA1）可能通过激活功能性甲酰肽受体（nFPRs）调节丝状肌动蛋白（F-actin）骨架重排促进肿瘤细胞的侵袭与转移。本项目首先构建了ANXA1-shRNA与FPR-shRNA稳定转染的U87细胞系，并在RNA及蛋白水平分别进行了验证，结果表明稳转干扰细胞系构建成功；IHC检测结果表明U87细胞主要表达FPR1；利用MTT实验检测了ANXA1及FPR对U87细胞增殖的影响，结果表明ANXA1及FPR1分别被干扰后，可以抑制U87细胞的增殖；利用Transwell实验检测了FPR对U87细胞迁移、侵袭的影响，结果表明FPR被干扰后，可明显抑制U87细胞的迁移、侵袭；利用Western Blot方法检测ANXA1、FPR1对肿瘤细胞中F-actin含量的影响，结果表明ANXA1可以通过FPR1影响肿瘤细胞中F-actin的重构；通过对PI3K通路及Rho/ROCK通路蛋白表达的检测，发现FPR蛋白下调后，AKT、Rac1、RhoA及F-actin蛋白均表达下调，而加入FPR激活剂fMLP后，RhoA及F-actin表达又有所相应上调；加入PI3K通路特异性抑制剂LY-294002作用后，与对照组相比，未干扰细胞中AKT蛋白及RhoA蛋白均表达下调，而FPR干扰细胞中AKT蛋白表达无明显变化，RhoA蛋白表达下调，结果表明PI3K通路可能参与了FPR介导F-actin重排促进肿瘤侵袭转移的过程。本项目研究结果表明ANXA1可以通过nFPRs介导F-actin的重排促进肿瘤细胞的侵袭与转移，为探索肿瘤发生及转移机制开辟一条新的研究途径，也为临床设计抗肿瘤转移的信号转导治疗提供理论依据。