组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对Kupffer细胞表型的影响及在DCD供肝热缺血再灌注损伤修复中的作用

Ischemia reperfusion injury is the main cause for liver dysfuncion even acute and chronic rejection after transplantation especially for donation after death,is the restraint of transplantation as a bottleneck. Immune and inflammatory response during ischemia reperfusion is a major mediator of liver injury. Numerous studies have demonstrated that Kupffer cells are the main effectors, on one side they secrete high levels of proinflammatory cytokines,resulting in liver injury,on the other side they also generate antiinflammatory mediators, such as HO-1、IL-10, to modulate the proinflammatory response and reduce the hepatic injury. The biphasic responses of KCs to liver IRI may be attributed to the different phenotypes.Transformation from M1 macrophages to M2 may be a good way to ameliorate liver IRI. Several recent experimental studies have demonstrated that HDAC inhibitors can modulate immune responses, enhance the production and suppressive functions of FOXP3+ regulatory T cells,and suppress proinflammatory cytokine production.Suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA) is such agent, so we investigated ①the Kupffer cells phenotypes difference in total and partial hepatic ischemia reperfusion injury model②the role of SHIP-deficient M2 Kupffer cells in partia hepatic ischemia reperfusion③the effect of SAHA on Kupffer cells④the effect of SAHA on liver ischemia reperfusion injury and repair.

心死亡供体（DCD）是缓解肝脏供需矛盾的重要来源，而缺血再灌注损伤（IRI）是影响DCD供肝移植效果的重要因素，移植器官保护再次成为研究的热点。Kupffer细胞是导致IRI的主要效应细胞，表型（M1、M2）差异可能导致了其在不同IRI模型中的双重作用。通过表观遗传学机制调控Kupffer细胞向M2型极化，有望为IRI的防治带来新的发展契机。鉴于组蛋白去乙酰基酶抑制剂SAHA免疫调节作用，我们拟研究①全肝和部分肝脏IRI中Kupffer细胞表型的差异；②SHIP基因敲除小鼠M2型Kupffer细胞在肝脏IRI中的作用③SAHA对Kupffer细胞表型的影响及机制；④全肝血流不同阻断时间对肝脏损伤、Kupffer细胞表型的影响以及SAHA在体内调控Kupffer细胞表型、肝脏损伤修复中的作用，为DCD供肝热缺血损伤的防治提供新的思路和理论依据。

肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)的发生是一个级联炎症反应的过程，其涉及的发病机制涉及多种因素的参与、相互作用的过程，其中钙超载、中性粒细胞的活化、氧自由基的生成等因素是缺血再灌注损伤发生、发展的三大主要机制。申请人前期研究结果表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA干预能能够减轻大鼠肝脏I/R引起的炎症因子升高和中性粒细胞浸润，改善肝功能损害和促进修，可能和诱导KC从M1型向M2型转变有关；肝脏缺血再灌注损伤模型中存在KC表型差异，可能和内毒素水平有关；SAHA能够减轻肠道粘膜紧密连接蛋白损害，保护肠道粘膜屏障功能，减少炎症因子和内毒素水平，降低中性粒细胞浸润从而有效改善肝功能损害和病理损伤,这些结果初步表明SAHA在肝移植过程中的潜在应用价值。本课题组在前期研究的基础上，结合运用遗传学、蛋白质生物化学、细胞生物学等方法与技术，分析研究SAHA在肝脏热缺血再灌注损伤模型大鼠体内参与调控缺血性损伤的作用，深入探讨SAHA信号转导过程的分子机制。综合上述结果，本研究为探讨SAHA抑制肝脏缺血再灌注损伤的机制奠定了坚实的工作基础。同时对于认识SAHA家族成员之间的关系提供了重要的启示性线索。项目资助发表相关SCI论文5篇，待发表两篇。培养博士生2名，均已经取得博士学位。项目投入经费70万元，支出55.24万元，各项支出基本与预算相符。剩余经费计划用于本项目研究后续支出。