基于“脾-营-脉相关”理论探讨健脾通脉方抑制血管平滑肌表型转化干预动脉粥样硬化的机制研究

The phnotype transdifferentiation of vascular smooth muscle cells is the pathogenic fundament of atherosclerosis and is drawing more concentration in academic feilds. The prospective study in the early stage of our team showed that spleen deficiency was closely related to AS, and the curative effect of Jian Pi Tong Mai Fomula（JPTMF) in the treatment of early AS was accurate.Our hypothesis is spleen-ying-vessel interrelation theory supports that JPTMF effects AS by inhibiting IKK protein phospholation through PI3K/Akt/NF-κB pathway in order to regulate the phenotype transdifferentiation of VSMC. This study will take ApoE-knockout mice and ox-LDL induced AS mice model as the objectives,in-vivo and in-vitro experiments will be taken to observe the influence of JPTMF to PI3K/Akt/NF-κB pathway to approach the target of JPTMF in treating AS, which will contribute for the treatment and prevention of AS with more scientific evidence and theoretical illumination.

血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cells,VSMC）表型转化作为动脉粥样硬化（Atherosclerosis, AS）的病理生理基础，近来倍学术界关注。项目组前期的前瞻性调查显示脾虚与AS密切相关，并应用健脾通脉方（JPTMF）治疗早期AS疗效确切。在此基础上，提出科学假说: “基于中医‘脾-营-脉相关’理论，JPTMF干预AS的有效机制可能是通过抑制IKK磷酸化，影响PI3K/Akt/NF-κB信号通路，调控VSMC表型转化，多靶点发挥抗AS作用。” 基于科学假说通过体内、外实验，以高脂饲料喂养的载脂蛋白E-基因敲除小鼠及ox-LDL刺激的C57BL/6J小鼠原代VSMC为研究对象，以JPTMF为干预因素，以PI3K/Akt/NF-κB通路为突破口，探讨JPTMF抗AS的机制与靶点，为AS未病先防、既病防变提供理论与实验依据。

血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cells, VSMC）表型转化作为动脉粥样硬化 （Atherosclerosis, AS）的病理生理基础，近来倍受学术界关注。项目组前期的前瞻性研究显示脾虚与AS密切相关，并应用健脾通脉方（JPTMF）治疗早期AS疗效确切。本项目基于中医“脾-营-脉相关”理论，通过体内、外实验，以高脂饲料喂养的载脂蛋白E基因敲除小鼠（ApoE-/-）及氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激的VSMC为研究对象，以JPTMF为干预因素，进行了系列研究，结果显示：1.发现高脂饲料喂养的ApoE-/-小鼠在AS早期出现饮食量增加、小鼠移动距离减少、抓力变弱、抗疲劳能力下降、粪便含水率上升、血清淀粉酶含量上升等脾气虚相关指标，证实脾气虚是AS性疾病的始动因素。2.通过体内动物实验发现JPTMF剂量依赖性地缓解AS模型小鼠体重、血脂水平（TC、TG、LDL、HDL）、脾气虚指标、血管主动脉增厚程度、粥样斑块聚集和平滑肌细胞增殖、迁移、收缩等作用，其疗效结果依次为高剂量JPTMF、阿托伐他汀、中剂量JPTMF、低剂量JPTMF。部分证实其干预机制与抑制PI3K、AKT、IKK、NF-κB的磷酸化蛋白表达有关。3.通过体外细胞实验研究发现JPTMF含药血清抑制通过抑制PI3K、AKT、IKK、NF-κB的磷酸化蛋白表达、NF-κB核转移作用，抑制ox-LDL诱导的VSMC细胞增殖、迁移和收缩等表型转化。4.通过IKKα和IKKβ激动剂、抑制剂和siRNA技术，发现IKKα和IKKβ在动脉粥样硬化平滑肌细胞损伤中起重要的介导作用；进一步通过实验发现JPTMF抑制IKKα和IKKβ磷酸化，调控VSMC表型转化、增殖、迁移和侵袭作用。以上结果表明JPTMF通过影响PI3K/Akt/NF-κB信号通路，抑制IKKα和IKKβ活化，抑制VSMC细胞增殖、迁移和收缩等表型转化，干预动脉粥样硬化的发生和发展。综上结果，本研究从细胞生物学、信号转导角度多学科交叉诠释“脾-营-脉相关”理论，利用体内实验和体外实验表明JPTMF多靶点发挥抗AS作用，为防治动脉粥样硬化的中药新药研发提供新的靶点，为AS未病先防、既病防变提供理论与实验依据。