基于SHR血管平滑肌表型转化探讨平肝活血方治疗高血压的分子机制

Tian ma shu xin ke li, a traditional Chinese medicine prescription with the effect of pacifying liver and activating blood circulation, is of great effectiveness on treating hypertension. The results of past studies implied that it may work on the phenotypic modulation of vascular smooth muscle cells(VSMCs) induced by hypertension. Therefore, in this research, we shall focus on VSMCs of spontaneously hypertensive rat(SHR). The model of VSMCs induced by AngⅡwill be settled and treated by Tian ma shu xin ke li.The results will be analyzed on the levels of cell, protein and gene. By the study, we will partly reveal the scientific connotation of traditional Chinese medicine, and offer an original idea to the hypertension therapy.

平肝活血方天麻舒心颗粒是传承名老中医经验总结的治疗高血压的有效方剂，有多年临床积累。在前期国家自然科学基金课题研究中发现，其可能对血管平滑肌细胞（VSMCs）表型转化这一高血压所致血管病变的重要病理环节有抑制作用。本研究拟以自发性高血压大鼠（SHR）胸主动脉平滑肌为研究对象，通过建立AngⅡ诱导的VSMCs增殖模型，应用天麻舒心颗粒进行干预，引入rt-PCR、Western blot等现代分子生物学技术，从细胞、蛋白质、基因等不同层面，观察天麻舒心颗粒对SHR血管平滑肌细胞表型转化的干预效果，并探讨其机制。研究可进一步揭示平肝活血方药治疗高血压的分子机制和科学内涵，为高血压及其所致血管病变的防治提供新的思路和方法。

高血压是心脑血管疾病的首要病因，血管平滑肌细胞（VMSCs）表型转化是高血压所致血管损害的重要病理环节。平肝活血方是传承名老中医经验总结的治疗高血压的有效方剂，有多年临床积累。本研究以自发性高血压大鼠胸主动脉VMSCs为研究对象，建立AngⅡ诱导的VMSCs增殖模型，应用平肝活血方进行干预。通过倒置相差显微镜观察细胞形态；采用比色法及流式细胞术测定细胞增殖率及细胞周期；采用免疫细胞染色法测定细胞α-SMA、OPN蛋白染色特点；RT-PCR法及Western blotting法测定OPN、α-SMA、AT1、AT2、ACE2、ERK1/2、P38MAPK的mRNA及蛋白表达。结果发现：AngⅡ诱导的VMSCs增殖模型出现表型转化，表现为：⑴体积增大，⑵细胞质中表型转化相关性蛋白OPN蛋白染色水平、mRNA与蛋白表达增加，α-SMA蛋白染色水平、mRNA与蛋白表达减少（P<0.05，P<0.01），⑶RAS活性成分紊乱：AT1的mRNA与蛋白表达增加，AT2、ACE2的mRNA与蛋白表达减少（P＜0.05），⑷ERK1/2、P38MAPK的mRNA及蛋白表达增加（P＜0.05）；中药组在细胞形态、表型转化相关蛋白、RAS活性成分、MAPK相关激酶等方面均有不同程度的改善（P<0.05，P<0.01）或呈现改善趋势，提示高血压血管损害的早期进程中即出现VMSCs表型转化，其特点为细胞体积增大，OPN的mRNA与蛋白表达增加，α-SMA的mRNA与蛋白表达减少，其机制可能与AngII-MAPK通路激活相关，平肝活血方药可能通过调节AngII-MAPK通路，对VSMCs表型转化产生有益的影响，进而早期干预高血压血管损害。研究探讨了高血压VMSCs表型转化的特点与机制，探索了高血压早期血管损害的病理机制，初步揭示了平肝活血方干预VMSCs表型转化的分子机制，丰富了中医治法的科学内涵，为中医药临床早期干预高血压提供了科学依据；此外，研究发挥中医“治未病”的指导思想，将高血压血管损害的干预节点前移至VMSCs表型转化阶段，为早期干预高血压血管损害提供了新的治疗思路与方法，具有重要的理论及实践意义。