基于“不通则痛”理论探讨癌痛平鼠妇纤溶成分PSLTro01镇痛增效的机制

Aitongping formula is an effective prescription developed by the national master of traditional Chinese medicine Prof. Zhou Zhongying in long-term clinical practice, which has good effects on relieving cancer pain. The previous prescription screening research finds that the analgesic effect of Aitongping is greatly reduced if pillbugs are removed. It also shows that pillbug extracts alone have strong anticoagulant and thrombolytic effects but no analgesic effects. Meanwhile, a brand new fibrinolytic protein PSLTro01 is discovered in pillbug extracts. Based on previous research, this project takes the previous research as the basis, with the “blood stagnation leads to pain” theory as the guiding principle, this project uses a rat model of bone cancer pain, and Aitongping and pillbug fibrinolytic protein as the intervention drugs. By studying miRNA and its regulatory network, observing biochemical changes in vivo and animal behaviors, we try to explore the relationship between fibrinolytic and analgesic effects on the miRNA regulatory network level, explain the “blood stagnation leads to pain” theory, and elaborate the mechanism of Aitongping’s analgesic effect on the molecular level. It will provide new thoughts for studying the mechanism and material basis of Chinese medicine’s analgesic effects, and provide new choice for treating cancer pain with traditional Chinese medicine.

癌痛平复方是国医大师周仲瑛教授经长期临床应用确有疗效的验方，对缓解癌性疼痛有良好的效果。前期处方筛选研究时发现，若将癌痛平中鼠妇去除，会大幅降低镇痛效果，但若单一使用鼠妇的各种提取物，则并无镇痛效果，但有较强的抗凝、溶栓作用，并在其中发现了一个全新的纤溶蛋白PSLTro01。本项目以前期研究为基础，以“不通则痛”病机理论为主导思想，以大鼠骨癌痛为模型，以癌痛平及鼠妇纤溶蛋白为干预药物，以miRNA及其调控网络为切入点，以miRNA-体内生化变化-动物行为学观察三位一体，尝试从miRNA调控网络水平阐明纤溶和促镇痛之间的相关性，阐释“不通则痛”病机理论内涵，在分子水平上阐释癌痛平镇痛作用机制，揭示中药镇痛作用产生的机理和物质基础，为中医药抗癌性疼痛研究提供新思路。

本课题以前期研究为基础，通过网络药理学，构建中药复方-疾病-靶点网络图谱，预测癌痛平与癌性疼痛的交叉靶点及可能作用信号通路。构建癌性疼痛模型，检测各组机械痛觉阈值和自主行走能力，X线、HE病理分析各组骨质破坏情况。生化仪检测各组大鼠血浆中凝血因子TT、FIB、APTT、PT的含量，检测鼠妇及鼠妇纤溶蛋白对大鼠凝血功能的影响；Elisa法检测各组5-HT、β-内啡肽、NO、TAFI的含量。基因芯片检测基因表达谱，分析信号转导通路，Western Blot法验证癌性疼痛相关信号通路靶点Ras、Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3等蛋白的表达。miRNA基因测序，对各组miRNA进行差异分析及生物信息学分析，挑选miR-511-3p细胞转染，实时定量PCR、western blot进行验证。利用AAV腺病毒构建Pik3cb沉默表达的股骨癌痛大鼠模型，通过动物行为学、ELSIA法及Western Blot观察Pik3cb基因沉默对癌痛平抑制癌性疼痛的影响。采用数据挖掘技术，收集中国知网、万方数据库等关于癌性疼痛的医家经验，从舌苔、脉象、病机、处方用药等方面与癌痛平进行分析总结。.研究结果表明：癌痛平可能通过调控SLC6A2、PTGS1、SLC6A4、KCNH2、PTGS2、ADRA1A、OPRM1等靶点及参与调控MAPK、PI3K、PKC/PKA信号通路抑制癌性疼痛。癌痛平能够有效提高模型大鼠的机械疼痛阈值，改善行走能力，抑制肿瘤造成的骨质破坏。方中鼠妇、鼠妇纤溶蛋白起联合增效作用，符合“通则不痛”疼痛治疗大法。癌痛平对基因表达谱有调控，差异表达基因涉及类固醇生物合成，脂肪酸代谢，血小板活化，炎症等方面。miRNA测序谱差异表达涉及炎症、粘附连接，血小板活化等方面。癌痛平可能通过抑制ERK，JNK，p38MAPK，PI3K信号通路的激活，抑制相关蛋白激酶磷酸化，调控Pik3cb、miR-511-3p的表达减轻癌性疼痛作用。数据挖掘结果显示癌性疼痛治法、方药主要涉及化痰、化瘀、解毒、散结、益气与癌痛平“消癌解毒，活血化瘀，通络止痛”相佐证。.本研究为癌痛平的临床应用提供微观实验依据，揭示中药镇痛作用产生的机理和物质基础，为丰富“癌毒”理论内涵打下基础。