子宫内膜缺血在腹腔子宫内膜异位病灶形成中作用及分子机制研究

Ischemic preconditioning (IPC) protects tissues from hypoxia injury by reducing apoptosis and facilitating angiopoiesis. Recently, our studies have showed that IPC facilitated the human endometrial fragments ectopic implantation on the chorioallantoic membrane model (CAM) by promoting angiogenesis and reducing apoptosis of endometrial tissues.In preliminary experiment, both "retrograde menstruation model "and "peritoneal endometriosis model" of Lewis rats were successful established by injecting endometrial fragments into the abdominal cavity of syngenic recipient rats.The endometrial fragments are pretreated with IPC, and then are injected into recipient rats. In different times after injecting endometrial fragments into abdominal cavity of recipient rats, the endometrial fragments and/or endometriotic lesions in abdominal cavity are examined both macroscopically ，microscopically and using electron microscope, and the size of the lesions are measured .The apoptosis in endometrial fragments and/or in endometriotic lesions are dynamically detected by TUNEL and the gene and protein of Akt、pAkt、Bcl-2、Bax are checked by Western-blot,RT-PCR in order to explor the molecular mechanism of IPC.This study is carried in order to prove the hypothesis that in normal women the retrograde endometrial cells die through apoptosis, while in endometriotic women IPC protects retrograde endometrial cells from apoptosis and then format endometriotic lesions. The conclusion of this study is a main replenish to "Sampson's reflux implantation theory", leading to a new idea to explain the etiology of endometriosis and propose new treatments for the disease.

缺血预处理（IPC）通过减少细胞凋亡，促进血管生成减轻组织缺氧性损伤，前期研究证实子宫内膜IPC通过促进移植内膜血管生成及抑制细胞凋亡提高内膜鸡胚移植成活率。在已建立大鼠"内膜腹腔逆流模型"、"腹腔内异症模型"基础上，经IPC处理的大鼠内膜碎片注射入受体鼠腹腔后不同时间，大体、光镜及电镜观察逆流内膜形态及腹腔种植成活率，研究IPC在腹腔异位病灶形成中作用；TUNEL、West-blot、RT-PCR等检测逆流内膜及/或异位病灶细胞凋亡及Akt、pAkt、Bcl-2、Bax基因及蛋白表达的动态变化，进一步研究IPC对逆流内膜细胞凋亡的调节及分子机制；验证正常妇女少许逆流内膜因凋亡从体内清除，而内异症妇女逆流内膜因IPC保护作用而长时间保持活力形成异位病灶；进一步补充了"经血逆流内膜种植学说"及"在位内膜决定论"；为合理诠释内异位症发病机制提供了全新思路，为开辟内异症新治疗提供可靠的理论依据。

背景：目前认为在位内膜的抗凋亡特性是子宫内膜异位症形成的关键因素，但是抗凋亡机制仍不明确。缺血预处理（IPC）是组织轻度缺血及再灌注可通过激活抗凋亡机制从而增加组织对继发致死性缺血耐受的一种现象。在非内异症女性中，子宫内膜的逆行碎片不会种植于腹膜表面，反之，内异症患者逆行子宫内膜碎片则可种植于腹膜表面。内异症患者子宫内膜轻度缺血可能在内异症发生发展中起重要作用，保护子宫内膜免受缺血损伤。.主要内容： C57BL／6小鼠EM模型是改良“同种异体腹腔注射内膜法”，研究影响建模的因素，探讨内膜数量及注射频次对内膜腹腔种植的影响。以及观察不同程度缺血子宫内膜进入腹腔后的动态变化及最终转归。小鼠子宫内膜IPC模型用于研究IPC在缺血内膜腹腔种植中作用及分子机制。.研究结果：1. 子宫内膜碎片数量与内异症诱导率正相关。腹腔注射次数与内异症诱导率正相关。2.缺血时间与诱导前后子宫内膜AI正相关。内异症诱导率与内膜存活率随缺血时间延长而下降。3.IPC在缺血子宫内膜腹腔种植中的影响：IPC+ISCH2h组成模率及内膜存活率高于ISCH2h组；IPC+ISCH4h组成模率及内膜存活率高于ISCH4h组。IPC+ ISCH 2h组AI低于ISCH 2h组，IPC+ ISCH 4h组AI低于ISCH 4h组。4.IPC分子机制：IPC+ISCH组AI低于ISCH组及IPC+ISCH+LY组，ISCH组与IPC+ISCH+LY组AI无差别。IPC+ISCH组p-Akt、p-Bad、p-GSK-3β、p-mTOR、p-4EBP1、p- S6高于CON组及ISCH组；ISCH组p-Akt、p-GSK-3β、p-mTOR、p-4EBP1、p- S6与LY+IPC+ISCH组相比无差别；IPC+ISCH组活化Caspase-3水平低于ISCH组及LY+IPC+ISCH，LY+IPC+ISCH组与ISCH组无差别。.结论与意义:IPC 促进正常非缺血内膜腹腔种植；IPC通过激活Akt信号通路，磷酸化其下游底物Bad、GSK-3β，抑制凋亡执行分子Caspase- 3活性，最终抑制缺血内膜细胞凋亡；通过磷酸化mTOR及其下游底物4EBP1、S6，促进缺血内膜细胞的生存。本研究结论是“Sampson's经血逆流种植学说”的重要补充，为子宫内膜异位症的病因学研究提供了新的思路，并为内异症提出了新的治疗方法