Stk40在早期胚胎发育过程中的作用及机制研究

Stk40是我们筛选发现的与早期胚胎发育相关的转录因子。前期发现：①该基因3.5倍差异高表达于8细胞阶段的小鼠胚胎中；②8细胞阶段发育阻滞的小鼠胚胎中Stk40表达显著下调；③ Stk40特异性抗体显微注射入小鼠单原核细胞中可致胚胎发育停滞于8细胞阶段；④Stk40抗体干预的发育阻滞胚胎中Oct4、ERK1/2的基因表达显著下调，提示Stk40可能通过调节Oct4、Erk/MAPK 信号通路在早期胚胎发育中发挥作用。本研究拟探讨Stk40在胚胎发育早期的生物学属性；观察Stk40基因过表达或表达沉默对ES细胞增殖的影响，评估Stk40在早期胚胎发育中的功能；观察Oct4基因过表达或表达沉默对ES细胞（Stk40过表达或表达沉默）增殖的影响，分析Stk40影响早期胚胎发育的机制。有关Stk40与胚胎早期发育的关系无文献报道，课题有源头创新性，为早期胚胎发育调控机制提供新线索。

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶40（stk40）在不同的信号转导通路与广泛的细胞活动中起着重要作用，包括细胞的增殖、分化、存活与凋亡。但是，Stk40 在植入前胚胎发育过程中的作用与分子机制尚无研究探讨。本研究表明，stk40影响了小鼠植入前的胚胎发育。免疫荧光和共聚焦显微镜分析表明，stk40在植入前小鼠胚胎印记控制区的所有阶段的细胞核和细胞质中有着同样的表达。反转录-聚合酶链反应显示在2细胞阶段stk40mRNA表现出显着较高的转录率。通过对小鼠受精卵显微注射小干扰RNA下调stk40的表达 (实验组) 与对照组相比, 能显著降低囊胚的形成率（stk40i‑1组与对照组：65.2%和77%，P＜0.05和stk40i‑2组与控对照组：49.8%和70.1%，P＜0.05）。此外，沉默stk40能显著增加网钙蛋白-2的转录率，但却降低了其同源蛋白CDX2的转录。总之，结果表明stk40在植入前胚胎的发育过程中至关重要。