基于阳郁神颓病机确立的强志方调控cAMP-PKA-CREB信号通路对抑郁模型大鼠海马神经再生的影响

Depression is closely related to the disorder of hippocampal neurogenesis.The cAMP-PKA-CREB signaling pathway is key to regulate neuron regeneration ,and it is also an important target of antidepression.Based on the plenty of previous theoretical and clinical researches,we construct a new theoretical system of “yang yu shen tui”(yang qi stagnation leading to spirit deficiency)pathogenesis,based on which,we invent an effective formula called “QiangZhiFang” which is a candidate of “Significant New Medication”, On the basis of the preliminary efficacy and mechanism researches ,we reveal the mechanism of the antidepressant “QiangZhiFang” and propose the hypothesis about the relation between “yang yu shen tui”and “the signaling pathway in nerve cells which affects the regulation and the control of regeneration of hippocampal neurons”. In order to reveal the scientific connotation of the hypothesis, the research on nerve regeneration and protection is adopted as an entry point, by using the classic depression model rats,observing the anti-depression of “QiangZhiFang” from the view of behavioristics such as open field tests and forced swimming tests. We apply the method of Immunohistochemistry to study the effect of QiangZhiFang on the expression of key protein PKA and CREB on the cAMP-PKA-CREB signaling pathway, and on the hippocampal neurogenesis, figuring out the biological mechanism and targets of QiangZhiFang’s anti-depression effect. The study will not only enrich the innovation of pathogenesis theoretical system of depression, but also will guide the clinical practice effectively, and provide scientific basis for inventing new drugs .

抑郁症发生与海马神经元再生障碍密切相关，cAMP-PKA-CREB信号通路是调控神经元再生的关键环节，也是抗抑郁治疗的重要靶点。在前期大量理论与临床研究的基础上，我们构建了抑郁症“阳郁神颓”创新的病机理论体系，并基于该病机理论创制了药效显著的“重大新药”候选药物—强志方，在初步药效与作用机制研究的基础上，提出了“抑郁症‘阳郁神颓’病机与神经细胞内信号通路对海马神经元再生调控相关”的假说。为进一步揭示该假说的科学内涵，研究以神经元再生与保护为切入点，采用经典的抑郁模型大鼠，从旷场实验、强迫游泳实验等行为学角度观察强志方抗抑郁作用，运用免疫组化等方法研究强志方对cAMP-PKA-CREB信号通路上的关键蛋白PKA、CREB表达及对海马神经发生的影响，明确强志方抗抑郁作用的生物学机制与作用靶点。研究不仅丰富发展了抑郁症创新的病机理论体系，有效指导临床实践，也为创新药物研发提供科学依据。

抑郁症发生与海马神经元再生障碍密切相关，cAMP-PKA-CREB信号通路是调控神经元再生的关键环节，也是抗抑郁治疗的重要靶点。在前期大量理论与临床研究的基础上，我们构建了抑郁症“阳郁神颓”的创新病机理论体系，并基于该病机理论创制了药效显著的“重大新药”候选药物—强志方（基本药物组成为：益智仁，远志，桂枝，白芍，川贝母，炙甘草等），在初步药效与作用机制研究的基础上，提出了“抑郁症‘阳郁神颓’病机与神经细胞内信号通路对海马神经元再生调控相关”的假说。为进一步揭示该假说的科学内涵，我们开展了如下工作并取得了一定的研究成果。理论研究方面，本项目立足中医“阳气”理论，从阳气与神、脏腑、营卫的关系，进一步论证并完善了抑郁症阳郁神颓病机理论体系，其成果以论文形式产出。实验研究方面，项目以海马神经元再生与保护为切入点，采用慢性温和应激法（CMS）制备抑郁大鼠模型，以糖水偏好实验、体质量、旷场实验检测其行为学；以HE染色、尼氏染色、TUNEL法、免疫荧光、电镜等方法检测抑郁大鼠海马形态结构及功能；以ELISA、Western-Blot、PCR、免疫组化等方法检测强志方对海马神经再生信号通路关键分子cAMP、PKA、CREB、BDNF蛋白及基因表达的影响。通过上述研究证实，抑郁模型大鼠存在快感缺失、生理代谢异常、探究行为下降等核心症状群；海马脑区会呈现不同程度的神经元结构、功能等病理改变；cAMP-PKA-CREB信号通路上的关键蛋白及基因有表达下调的趋势。经强志方干预后，其抑郁样行为得到明显改善，海马脑区神经元结构、功能可接近正常水平，信号通路的关键蛋白及基因表达上调。说明强志方可通过调节cAMP活性，激活PKA进而磷酸化CREB，最终促进BDNF的表达，营养海马神经元，通过作用于cAMP-PKA-CREB-BDNF信号通路调节CMS模型大鼠海马脑区神经元再生，改善海马脑区结构、功能的损伤，进而达到抗抑郁作用。.综上，本项目在研究思路上体现了创新中医理论与学科前沿相结合，研究不仅丰富发展了抑郁症创新病机理论体系，有效指导临床实践，而且对创新药物研发提供了实验依据。