中药复方肠胃清逆转结肠癌草酸铂耐药的细胞铜稳态调节机制

结直肠癌是恶性肿瘤的主要死亡原因之一,2010年美国结肠癌临床实践指南中，草酸铂仍被推荐为治疗晚期结肠癌一线药物,但肿瘤的原发或获得耐药是化疗失败的重要原因。研究发现，耐药形成最普遍存在的现象是细胞内药物蓄积水平降低。最近研究证实,细胞铜稳态机制调控含铂药物细胞的摄入和排出,参与含铂药物的耐药。本研究应用我们建立的结肠癌草酸铂耐药细胞株HCT116/OX和其亲本株HCT116,采用体内、外实验,观察肠胃清对草酸铂耐药的逆转作用;运用原子吸收分光光度法，观察中药对草酸铂作用时整个细胞以及核内DNA草酸铂蓄积水平的影响,研究中药作用后,细胞摄入、排出草酸铂速率的变化；运用Western blot 、荧光定量PCR方法,观察中药对与草酸铂摄入、排出相关铜转运蛋白hCTR1、ATP7A、ATP7B、MRP2表达的影响；采用共聚焦显微镜观察hCTR细胞内定位，进一步阐明肠胃清逆转结肠癌耐药的分子机制

目的：草酸铂被推荐为治疗晚期结肠癌一线药物，但肿瘤的原发或获得耐药是化疗失败的重要原因。本课题从铜转运蛋白与铂类耐药相关联的角度，体内、外观察肠胃清对铂类药的增效减毒作用，为中医药防治结肠癌及其铂类耐药提供理论及实验依据。.方法：应用我们建立的结肠癌草酸铂耐药细胞株HCT116/OX和其亲本株HCT116，通过体内、外实验，并利用Western Blot、RNA干扰、流式细胞术、实时荧光定量PCR等技术，观察肠胃清对草酸铂耐药的逆转作用。.结果：.1. 体内实验研究表明，对HCT116、HCT116/L-OHP两种皮下移植瘤抑制效果由强到弱依次为：肠胃清高剂量 + L-OHP组、肠胃清低剂量 + L-OHP组、L-OHP组、肠胃清组、L-OHP组的抗瘤效果因肠胃清而得到增强；两种荷瘤小鼠体重在治疗后均有减轻，以L-OHP组最为显著，肠胃清联合L-OHP组体重减轻少于L-OHP组。.2. 体外实验研究表明，HCT116/L-OHP细胞株对L-OHP的耐药指数为12.00；肠胃清药物血清干预后，可以逆转其耐药，逆转指数为2.74。.3. 肠胃清药物血清可以增加HCT116细胞内铂药物含量（P<0.05），对耐药株中铂药物含量的有增加趋势；研究还发现肠胃清药物血清能够增加HCT116细胞和HCT116/L-OHP细胞内Pt-DNA的含量，与单独L-OHP作用相比，增加倍数分别为23.36%和15.74%。.4. 肠胃清药物血清可以浓度依赖性地促进结肠癌细胞对L-OHP的摄入；同时呈浓度依赖性的抑制人结肠癌细胞排出铂药物，但排出过程在30min后几乎不再变化。.5. 肠胃清药物血清能够一定程度上降低耐药株中铜排出蛋白ATP7A、ATP7B的表达，升高铜摄入蛋白hCTR1的表达。.结论：肠胃清可通过影响铜转运相关蛋白的表达、抑制铂的细胞排出、增加铂的摄入、提高细胞内Pt-DNA水平，逆转结肠癌细胞对草酸铂的耐药。