RNA干扰erbB家族对胃癌细胞株的作用及对EGFR信号转导通路的影响

针对人表皮因子受体erbB家族成员间相互作用及靶向erbB药物（吉非替尼等）抗肿瘤疗效欠佳的机制尚未明确的问题，开展RNA干扰erbB家族对胃癌细胞株的作用及对EGFR信号转导通路影响的研究。前期研究结果提示EGFR的基因突变及HER2/HER3的蛋白表达水平与吉非替尼疗效和预后相关，因此提出erbB家族成员间的相互作用可能与靶向erbB药物的疗效多样性及耐药相关的假说，拟采用基因沉默技术，分析沉默不同erbB家族成员对胃癌细胞株的影响及对吉非替尼抑制作用的影响，验证此假说，探讨erbB家族成员相互作用可能的倾向性，明确吉非替尼对特定胃癌细胞的不同抑制能力，分析对吉非替尼敏感的分子标记物，探讨吉非替尼不敏感及耐药的机制，为阐明抗EGFR分子靶向药物的作用机制，筛选靶向erbB家族药物的有效人群提供思路。

人表皮生长因子受体erbBs家族成员间相互作用及靶向erbBs药物（吉非替尼）在胃癌中疗效欠佳的机制尚不清楚。本研究提出erbBs家族成员间的相互作用可能与靶向erbBs药物的疗效多样性及耐药相关的假说。我们构建了慢病毒（针对EGFR、Her2、Her3），并干扰人胃癌细胞系MKN45，分析干扰erbBs家族对胃癌细胞株的影响及对信号转导通路的影响，也初步探讨了Gefitinib在胃癌细胞株中的作用机制及可能的耐药原因。我们的研究发现：用病毒干扰沉默EGFR、HER2、HER3后，胃癌细胞生存率均发生了一定程度的下降，凋亡率明显增加，细胞覆盖面积明显减少；药物分别作用于后，各组细胞生存率均呈浓度依赖性下降，凋亡率明显增加，细胞覆盖面积明显减少。沉默EGFR、HER2较正常对照组克隆增殖明显下降；沉默HER3后与正常对照组克隆增殖无明显差别，沉默EGFR、HER2抑制细胞克隆增殖能力，沉默HER3对细胞克隆增殖能力无明显抑制；Gefitinib作用后对照组、阴性干扰组、EGFR干扰组、HER2干扰组、HER3干扰组细胞集落数均明显减少，其中沉默EGFR后细胞克隆增殖明显下降。干扰组中EGFR、HER2、HER3总蛋白及其下游通路中的AKT、SRC、STAT3基因总蛋白表达无明显变化；p-EGFR、p-HER2、p-HER3 及其下游通路中的p-AKT、p-SRC、p-STAT3蛋白表达下调；Gefitinib作用后也发生了相似的变化。EGFR和HER2同时干扰组、EGFR和HER3同时干扰组、HER2和HER3同时干扰组细胞的生存率均发生了一定程度的下降，凋亡率增加。我们的研究证实：1.EGFR家族成员共同参与细胞的生长、繁殖并且维持其生命活动；2.Gefitinib作用于胃癌细胞，不仅单独抑制了EGFR酪氨酸激酶活化，也可能作用于erbBs家族中的其它成员的其它靶点，同时阻止EGFR同源二聚体、EGFR/HER2及EGFR/HER3等异源二聚体的信号下传，并影响其下游蛋白的功能、表达及信号下传。3.由于胃癌细胞的异质性明显，erbBs家族成员的表达参差不齐，信号传导通路纷繁复杂，以及信号传导通路的负反馈作用，使靶向EGFR药物的疗效呈现多元化，临床疗效不佳并早期出现耐药。