诱导AICD提前发生的机制与fraxinellone的免疫抑制作用

活化诱导的T细胞死亡（activation induced cell death，AICD）是机体维持生理平衡的重要方式，但其发生通常滞后于免疫炎症。我们前期发现，中药成分fraxinellone可诱导FasL提前表达和抑凋亡蛋白cFLIP降解，从而促成活化T细胞AICD提前发生，使其在发挥效应前进入凋亡程序。本研究拟针对这一崭新现象，考察fraxinellone促使AICD提前发生的时间效应；考察化合物对诱导AICD发生的上游活化因子和相关转录因子的影响；进一步以死亡诱导信号复合体（DISC）和cFLIP分子为中心，利用遗传改造的模式动物和细胞株探讨fraxinellone影响凋亡启动和级联通路的分子机理，寻找其作用靶点；阐明由该化合物代表的选择性免疫抑制活性在自身免疫性疾病治疗中的作用和意义。

本课题考察了中药成分fraxinellone对活化诱导的T细胞凋亡的调控信号，阐明fraxinellone促使凋亡发生的时间效应和分子机理，探讨faxinellone通过调控凋亡通路蛋白如FasL/Fas等，从而选择性作用于活化T淋巴细胞凋亡通路的原理，探讨fraxinellone影响凋亡启动和级联通路的分子机理，寻找其作用靶点；阐明由该化合物代表的选择性免疫抑制活性在自身免疫性疾病治疗中的作用和意义。.首先探索fraxinellone诱导凋亡的通路。用JC-1染色，用荧光显微镜、荧光分光光度计和流式细胞仪测定线粒体的跨膜电位，结果发现fraxinellone选择性诱导多种方式—Con A、PHA、PMA、anti-CD3、anti-CD3 和anti-CD28等活化的T细胞线粒体的跨膜电位丢失，并呈现剂量依赖性。.考察fraxinellone选择性诱导活化T淋巴细胞凋亡过程中激活的caspase级联网络，结果发现fraxinellone激活了caspase-9， caspase-12和caspase-3等。而对细胞因子相关caspase-1无显著影响。.考察fraxinellone对于PTP与cytochrome c释放的关系。用PTP特异性抑制Cs A处理，可剂量依赖性阻断fraxinellone选择性诱导的活化T淋巴细胞线粒体跨膜电位的丢失，亦可部分阻断fraxinellone选择性诱导的活化T淋巴细胞释放cytochrome c。.考察fraxinellone选择性诱导活化T淋巴细胞凋亡过程中Ca2+和ROS的变化，结果发现fraxinellone不影响细胞中Ca2+和ROS，提示其他因素参与调节PTP的开启。结果表明fraxinellone选择性诱导活化T淋巴细胞凋亡过程中Bax和Bad转座入活化T细胞的线粒体。.PI-3 Kinase 、CaM、MAPK相关信号通路和细胞周期相关激酶参与或调控了fraxinellone选择性诱导活化T淋巴细胞凋亡及Bad转座入线粒体的过程。.本研究在三个T细胞介导的免疫相关疾病动物模型上观察了fraxinellone的治疗作用。.本课题研究已投稿并接收5篇平均影响因子4以上的SCI论文，申请专利2项，培养4名研究生毕业。对照课题计划书，已超额完成研究任务。