CLC-3氯通道在增生性瘢痕形成中的作用与机制

Hypertrophic scars cause cosmetic disfigurement , pruritus, pain and contractures of the patients. Many studies showed that the excessive proliferation , inhibition of apoptosis of fibroblast cell and the out-of-balance of metastasis of ECM play important roles in the formation of hypertrophic scar. As the volume-sensitive chloride channel, CLC-3, participate in many cell functions such as proliferation, apoptosis , differentiation and secretion, we hypothesise that the overexpression and functional enhancement of the fibroblast cell may facilitate the formation of the hypertrophic scar. In this study, we aim on the volume-sensitive chloride channel CLC-3 to study the difference of the expression and function of normal and hypertrophic scar fibroblast cells. Further more, we study it's roles and machanism in proliferation, apoptosis and secretion of fibroblast and clarify whether it would prevent the development of the hypertrophic scar. It will reveal the principle of ion channels regulating the proliferation, apoptosis and secretion of fibroblast cells to participate in hypertrophic scar process. As an aim we can explore the new therapy of hypertrophic scar formation and strategies to treat hypertrophic scar.

创面修复过程中，由于多种原因引起的创面愈合障碍，导致成纤维细胞的大量增殖、凋亡抑制、细胞分化以及细胞外基质（ECM）中胶原合成与降解失衡，引起增生性瘢痕的产生，从而影响患者的外观与功能，降低患者的生活质量。鉴于容积激活型氯通道（CLC-3）与细胞的增殖、分化、凋亡及分泌功能密切相关，结合相关的实验结果，我们推测CLC-3表达增多、功能增强可能是导致增生性瘢痕形成的原因；本研究以CLC-3为研究对象，通过构建过表达及抑制表达慢病毒载体转染细胞、使用氯通道阻滞剂抑制其功能的方法，研究其对增生性瘢痕成纤维细胞上述各功能的影响，并明确CLC-3的改变影响成纤维细胞在增生性瘢痕形成中的作用和机制，从一个新的层次和角度探索增生性瘢痕形成的机理，为增生性瘢痕的治疗提供新的靶点与策略。

创面修复过程中，由于多种原因引起的创面愈合障碍，导致成纤维细胞的大量增殖、凋亡抑制、细胞分化以及细胞外基质（ECM）中胶原合成与降解失衡，引起增生性瘢痕的产生，从而影响患者的外观与功能，降低患者的生活质量。本研究基于人增生性瘢痕成纤维细胞，通过构建CLC-3干扰及过表达载体及CLC-3抑制剂对人增生性瘢痕成纤维细胞的影响，研究CLC-3氯通道在增生性瘢痕形成中的作用与机制。本课题以人增生性瘢痕成纤维细胞HSFB和人正常皮肤成纤维细胞 NSFB为材料，通过构建CLC-3干扰及过表达载体处理细胞，及运用CLC-3抑制剂NPPB、Tamoxifen、Wortmannin、SB431542、PD98059处理细胞后，检测细胞活力、细胞凋亡、细胞周期、相关信号通路蛋白p-AKT、p-ERK、p-MEK等表达情况，来阐述CLC-3在增生性瘢痕形成中的作用。我们研究发现：与正常皮肤组织相比，瘢痕组织CLC-3和TGF-β在瘢痕组织的阳性表达显著升高；CLC-3、TGF-β1在HSFB细胞中的相对表达高于在NSFB细胞的表达。过表达CLC-3可以降低HSFB细胞的凋亡率，促进细胞分裂；干扰CLC-3可以提升HSFB细胞的凋亡情况并抑细胞分裂。过表达CLC-3可以促进TGF-β1、Smad3、AKT、p-AKT等相关蛋白的表达情况，干扰CLC-3则抑制这些蛋白的表达。PI3K/AKT 抑制剂能抑制过表达CLC-3对于细胞凋亡率的影响，而所有抑制剂均能抑制过表达CLC-3对于细胞分裂的促进作用。因此，我们得出结论： CLC-3通过激活PI3K-AKT/ TGF-β1/Smad3信号通路促进瘢痕组织的增生。该研究揭示CLC-3在增生性瘢痕形成中的作用和机制，为临床治疗增生性瘢痕提供新的策略。