P糖蛋白参与耐药癫痫网络形成机制初探

Refractory epilepsy (RE) is well-known of poor prognosis, The mechanism of its poor prognosis might be related with the inflammation. Our previous work has found that NF-κB and P-gp are highly expressed in epilepsy model in vitro, which has been also confirmed in tumor, In addition, it has been reported that TLR4 signaling pathways was involved in the development of intractable epilepsy, including NF-κB, IL, TNF-α. This study intends to do further exploration on the key elements of P-gp taking part in the network of drug-resisitant epilepsy, We would intervene key elements, improve the patients outcomes, try to resolve drug-resistance of refractory epilepsy.

难治性癫痫（RE）的治疗效果差，预后不佳，可能与癫痫耐药以及炎症反应的双重机制参与其中有关。本课题组前期工作已发现癫痫细胞模型中存在耐药蛋白P-gp的活化以及转录因子NF-κB 表达增加，两者可能参与了癫痫耐药机制，这在细菌以及肿瘤耐药中亦得到证实；另一方面，文献报道TLR4炎症信号通路参与难治性癫痫的发生发展，其中转录因子NF-κB亦在其中发挥了重要作用。本课题拟在耐药癫痫动物模型中进一步探讨P糖蛋白在耐药癫痫网络形成中发挥的机制，继而筛选关键因子，从而对耐药癫痫网络通路中关键因子进行干预，为临床解决难治性癫痫耐药，改善患者预后提供新的思路。

背景：癫痫发作及至癫痫耐药形成过程中有炎症因子介导的炎症信号通路参与，该炎症信号通路也进一步参与癫痫耐药的形成，两者相互影响、相互促进并成为恶性循环，自此形成耐药癫痫网络。.主要研究内容：本研究通过耐药癫痫大鼠模型对耐药癫痫网络进行探讨研究，观察了不同时间点癫痫大鼠脑区TLR4、P-gp、IL-1β、TNF-α的表达情况水平情况。对TLR4、P-gp、IL-1β、TNF-α、NF-B参与耐药癫痫网络的作用有了实验室证据。构建了TLR4缺陷大鼠模型，观察了TLR4低表达对下游P-gp、IL-1β、TNF-α、NF-B表达水平的影响。通过mRNA、蛋白表达水平，以及海马、杏仁核组织部位的表达水平，全面认识TLR4对下游因子的影响以及对大鼠行为学的影响。对靶点TLR4进行干预，摸索合适的TLR4沉默病毒数量进行干预，以达到TLR4在耐药癫痫大鼠中低表达，观察耐药癫痫大鼠中P-gp、TLR4、NF-B的表达水平变化。.重要结果及科学意义：明确了TLR4、P-gp、IL-1β、TNF-α、NF-B信号因子参与耐药癫痫网络的形成，明确了TLR4作为上游调控因子对下游IL-1β、TNF-α、NF-B等因子进行调控，进而影响了P-gp的表达水平，从而导致了癫痫耐药的产生，此可能为癫痫耐药中的重要一环。进一步对TLR4进行干预，结果发现下游IL-1β、TNF-α、NF-B、P-gp的表达均受到影响，脑内杏仁核、海马区域的各因子表达水平明显受到抑制。结果认为对TLR4进行一定程度干预，可减轻癫痫耐药的发生。明确耐药癫痫网络的一条路径，并提出了干预TLR4可能减轻难治性癫痫耐药。但TLR4介导的急性炎性损伤机制可能未对急性癫痫大鼠造成明显的细胞坏死，后期还需在慢性癫痫耐药大鼠中进一步验证。