细胞粘附分子Necl-4介导CMT雪旺细胞--轴索相互作用的机制研究

Charcot-Marie-Tooth disease is the most common genetic disease of the nervous system. There is no efficient therapy for CMT now. The disability rate is still high. So the pathophysiological mechanism and therapy researches are important. Necl-4 a cell adhesion molecules on Schwann cell bind to Necl-1 on axon, of which induce Schwann cell-Axon interaction. On these grounds we propose to obtain CMT diagnosis by MPLA,CMT-gene chip scanning; through investigating the expression of Necl-4, and the combine with Necl-1 to confirm Necl-4 mediated CMT pathogenesis. Detect Necl-4 level in vitro and in vivo after AVVNecl-4 transfection the Schwann cell of CMT patients and the CMT animal model, investigate increase the Necl-4 expression will improve the interaction between Schwann cell and axons, will promote the remyelination and axons integrity. So as to explore the feasibility Necl-4 as a therapeutic target of CMT.

Charcot-Marie-Tooth disease (CMT)是神经系统最常见遗传病之一，尚无有效治疗，具有高致残率，因此研究其病理生理机制及治疗很重要。目前研究表明雪旺细胞-轴索之间相互联系的破坏是CMT的病理生理机制；Necl-4是在雪旺细胞表达的粘附因子，通过与轴索上的配体Necl-1结合介导雪旺细胞-轴索相互联系。据此，本研究拟通过：MPLA、基因芯片筛查，获得中国人CMT基因变异特点及确诊病例；观察CMT患者活检周围神经及动物模型的Necl-4表达水平，及Necl-4与轴索上表达的Necl-1的结合能力，从而探讨Necl-4在CMT发病中的作用；通过Necl-4腺病毒载体转染CMT患者雪旺细胞及CMT模型鼠，在体外细胞水平及体内水平探讨Necl-4表达的增加是否可提高雪旺细胞-轴索之间作用，促进髓鞘再生及维护轴索完整。从而探讨Necl-4作为CMT治疗靶点的可行性。

CMT是最常见的神经系统遗传病，以肌无力、萎缩为主要表现，渐加重丧失劳动能力、生活不能自理/死亡。目前尚无效治疗。具有高度致残率、致死率。CMT具有高度的临床、遗传异质性。目前变异基因编码蛋白异常导致的后续髓鞘脱失，轴索变性、丢失的病理生理机制尚不清楚。本研究拟通过研究CMT患者粘附分子Necl-4在髓鞘--轴索联系中的作用，揭示CMT患者蛋白变异后续的病理生理机制。通过临床研究我们收集了115例CMT患者/家系资料。其中73例行腓肠神经活检，58例行致病基因筛查。其中CMT1A 14例、HNPP 5例、CMT1 54例、CMT2 23例、dHMN 14例、CMTX 4例、CMT 4例。发现新发突变12个。其中3例患者/家系有锥体束受损体征。2例CMT患者同时合并了另外一种遗传性疾病——进行性肌营养不良。而且发现部分CMT患者脑脊液蛋白水平显著升高。上述临床发现拓展了CMT临床表型、病理表型、基因表型的谱系。在临床研究的基础上，我们在病理水平比较了各型CMT患者、其它慢性周围神经病患者、正常人（外伤截肢）周围神经Necl-1 和 Necl-4 表达量，并分析 Necl-4表达与周围神经病理改变关系。从而初步揭示了Necl-4介导了周围神经雪旺细胞- 轴索相互作用。主要结果：1）58例患者行基因筛查，43例发现致病突变，阳性率74%，其中新发突变12个。病理及分子生物学水平证实2例CMT合并进行性肌营养不良。2）52例患者行腰穿脑脊液蛋白检测：25例脑脊液蛋白不同程度升高。3）腓肠神经活检结果显示，45例以髓鞘病变为主，表现为残存有髓纤维髓鞘变薄、增厚、打折；洋葱球形成；小径有髓纤维丛集。26例轴索变性为主。4）免疫荧光染色结果显示：Necl-1 和 Necl-4在CMT组表达量上调，在其它慢性周围神经病组也上调。在各型CMT患者中Necl-4表达水平无明显差异。提示：Necl-4在神经再生中可能发挥一定作用，为今后研究CMT神经再生提供一些理论基础。