从microRNA表达差异探讨健脾温肾法防治肺癌术后复发转移的机制

肺癌死亡率居恶性肿瘤之首，术后易复发转移是导致预后不良的重要原因之一。根据正气不足，痰瘀毒聚是肺癌发生的病因病机理论，提出健脾温肾法不治痰而痰自消，从源头截断"痰浊"滋生蔓延，阻止肿瘤复发转移的假说。前期临床研究结果表明，健脾温肾法能有效抑制肺癌的进展,但其机制研究尚需深化。本课题一方面基于裸鼠肺癌术后转移模型，动态观测肺癌术后转移过程；围绕肺癌转移相关microRNA治疗前后差异表达，分析其靶基因mRNA转录后表达水平。另一方面通过健脾温肾法治疗Ⅲ期肺癌术后的临床研究，观察术后1年无病生存率及肿瘤转移情况；进一步以肺癌患者外周血治疗前后microRNA表达的差异与动物实验得到的结果比较分析。本研究将论证上述假说，并阐明microRNA的表达差异对健脾温肾法防治肺癌术后复发转移分子作用机制。该研究结果将为中医个体化治疗由传统主观辩证更新为主观辩证与微观生物学标识相结合的主客观结合提供依据。

本研究采用裸鼠皮下移植瘤肺癌术后复发转移模型，利用活体成像、分子生物学、病理学等手段，首次发现：（1）健脾温肾法可提高皮下移植瘤裸鼠术后的生存质量，抑制肿瘤细胞在体内的生长速度，降低术后复发转移率，延长无病生存时间；（2）健脾温肾法防治肺癌术后复发转移的机制可能是通过有效下调miR-18a、miR-7641的表达量，从而下调其相关靶蛋白EGFR、AKT1、CXCL1的mRNA表达有关；（3）以化痰散结为主的软坚散结方可有效防治肺癌术后的复发转移，疗效优于单纯化疗，机制与其能够下调miR-182、miR-18a、miR-106b、miR-7641表达，从而影响其靶基因PIK3CA、EGFR、AKT1、CXCL1mRNA表达，抑制肿瘤细胞增长，降低肺转移率，提高术后生存质量，延长无病生存时间有关。（4）术后辅助化疗可防治肺癌的术后复发转移，其机制与其能够下调miR-7641表达从而影响其靶基因CXCL1mRNA表达，但其降低术后的生存质量，无病生存时间未体现出生存获益。（5）肺癌术后化疗可上调肺癌患者外周血中具有抑癌基因作用的miRNA（如let-7a、MicroRNA-200c）表达，提示化疗有良好获益；病期越晚的肺癌患者更易从术后辅助治疗中获益。（6）中医扶正法联合化疗是具有致癌基因作用的miRNA-155产生表达下调趋势，较单纯化疗组有优势。（7）中药可作用于肺癌患者及裸鼠的miRNA，从而引起其表达差异，可能是其防治肺癌术后复发转移分子作用机制。（8）健脾温肾方及软坚散结方可能是通过调节miRNA表达差异从而调节靶基因EGFR、VEGF、ERBB2，对肿瘤细胞的增殖、迁移、血管生成产生影响，其深层机制可能是与PI3K/Akt、NFkB、MAPK/ERK下游信号通路有关，值得深入研究。本研究证实了根据正气不足，痰瘀毒聚是肺癌发生发展的病因病机理论，不仅证实了健脾温肾法可以有效防治肺癌的复发转移，同时也揭示出以化痰散结为主的中药可能在复发转移防治中的应用价值，为中医药防治肺癌术后复发转移提供新的思路。