miR-494通过靶向作用于SCGN调控小细胞肺癌化疗抗药性的研究

Multidrug resistance is the key factor of the failure treatment in small cell lung cancer(SCLC).Our previous study showed that secretagogin( SCGN) was associated with chemoresistance. SCGN may be as a potential target gene of miR-494. To further investigate this mechanism, the analysis of luciferase reporters will be used to confirmed that the targeting relationship between miR-494 and SCGN related molecules.In addition, the effect of SCGN on SCLC drug-resistance was analyzed by up or down-regulation of miR-494. Further more, the pathway and network of SCGN regulating drug-resistance of SCLC was investigated by cDNA microarray and proteomics.Last, the expression of miR-494 and SCGN in before and after chemotherapy blood specimens were detected. The results will confirm the molecular mechanism of SCGN affecting drug-resistance in SCLC, and provide new theory basis to clarify the drug resistance mechanism of SCLC and new target for the treatment of SCLC.

多药耐药是导致小细胞肺癌(SCLC)治疗失败的关键，我们前期研究发现促泌素(SCGN)与小细胞肺癌的抗药性关系密切，miR-494对 SCGN可能有靶向调控作用。为进一步明确其调控分子网络，本课题拟利用SCLC耐药细胞H69AR开展以下研究：（1）荧光素酶活性分析实验验证miR-494对SCGN的靶向调控作用。（2）基因转染增加或降低细胞中miR-494的表达，分析其调控SCGN 表达对小细胞肺癌耐药性的影响；(3) 基因芯片发现SCGN的可能下游调控基因，染色质-免疫吸附沉淀(ChIP)、免疫吸附共沉淀(Co-IP)及 RAN 干扰等技术证实其靶基因及调控网络; (4)检测SCLC化疗前后血液标本中miR-494与SCGN的表达及其与耐药的关系。通过本项目研究，进一步丰富小细胞肺癌耐药的分子机制，为下一步开展基于SCGN靶基因的SCLC耐药的研究提供依据。

多药耐药是导致小细胞肺癌(SCLC)治疗失败的关键，我们前期研究发现促泌素(SCGN)与小细胞肺癌的抗药性关系密切，miR-494对SCGN可能有靶向调控作用。为进一步明确其调控分子网络，本课题利用SCLC耐药细胞H69AR开展以下研究：（1）荧光素酶活性分析实验验证miR-494对SCGN的靶向调控作用。（2）基因转染增加或降低细胞中miR-494的表达，分析其调控SCGN 表达对小细胞肺癌耐药性的影响；(3)检测SCLC化疗前后血液标本中miR-494与SCGN的表达及其与耐药的关系。研究结果显示，SCGN的高表达与患者的预后差及化疗耐药相关，下调SCGN的表达能够通过促进细胞凋亡和细胞周期阻滞增加细胞对化疗药物的敏感性，上调SCGN的表达能够降低细胞对化疗药物的敏感性，荧光素酶实验显示SCGN是miR-494的靶向作用基因，上调miR-494的表达能够增加细胞对化疗药物的敏感性。研究结果提示miR-494通过靶向作用于SCGN调节小细胞肺癌的耐药，可能作为小细胞肺癌疗效预测的潜在生物标志物。通过本项目研究，进一步丰富小细胞肺癌耐药的分子机制，为下一步开展基于SCGN靶基因的SCLC耐药的研究提供依据。