基于Wnt/β-catenin信号通路探讨TSLC1在肝癌中的作用及其分子机制

Destruction of the epithelial cell adhesion and cell polarity not only promotes the development of malignant tumors, and is involved with primary tumor invasion and metastasis, in which Wnt/β-catenin signal pathway plays an important role. TSLC1 is a novel tumor suppressor gene with cell adhesion function, whose mechanism in the inhibition of tumorigenesis, metastasis and epithelial-mesenchymal transition is unclear. To clarify the role and internal mechanism of TSLC1 in hepatocellular carcinoma, this study will investigate the function of TSLC1 involved in the maintenance of cell adhesion,cell polarity and liver cancer formation through the establishment of a liver cell model. Moreover, we also study the effect of TSLC1 in inhibition of tumor epithelial-mesenchymal transition, and analyze the role of Wnt signaling pathway in liver cancer inhibition by TSLC1. Finally, we design an oncolytic adenovirus vector Ad-Wnt-TSLC1 targeting the abnormal Wnt pathway, and analyze and evaluate the mechanism on antiproliferation of liver cancer cells by the intracellular expression of TSLC1.

上皮细胞黏附和极性的破坏不仅促进恶性肿瘤的发生发展，并与原发性肿瘤的浸润和转移相关，其中Wnt/β-catenin信号通路扮演着重要作用。TSLC1是一种具有细胞黏附功能的新型抑癌基因，其在抑制肿瘤发生、转移以及上皮-间质转化等事件中的机制尚不清楚。为了阐明TSLC1在肝癌中的作用及内在机制，本研究拟通过建立肝细胞模型探讨TSLC1参与细胞黏附和维持细胞极性的作用以及与肝癌形成的关系；同时研究TSLC1抑制肿瘤上皮-间质转化的功能，并分析Wnt信号通路在TSLC1抑制肝癌中的作用。最后，我们设计靶向Wnt通路异常携带TSLC1基因的溶瘤腺病毒载体Ad-Wnt-TSLC1，并对其介导的细胞内表达TSLC1抗肝癌细胞增殖的作用机制进行分析和评价。

肝癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，抑癌基因的失活和信号通路的异常激活被认为是肝癌发生发展的重要机制。抑癌基因TSLC1在多种实体肿瘤包括肝癌中存在表达缺失或降低，同时Wnt信号通路在肝癌发生中也扮演着重要作用。为了探明TSLC1和Wnt信号通路在肝癌发生发展中的作用，本课题研究了抑癌基因TSLC1与Wnt信号通路的关系、TSLC1对Wnt信号通路靶基因的影响、抑制肿瘤上皮-间质转化、肝癌细胞迁移和侵袭的作用，以及TSLC1对肝癌细胞生长的抑制作用。.首先，构建了携带TSLC1的真核表达载体和慢病毒载体，检测了TSLC1在人肝正常细胞和癌旁正常细胞的表达高于肝癌细胞和临床肝癌样本细胞，通过检测TOPflash/FOPflash 报告基因活性发现过表达TSLC1能够下调Wnt信号通路的活性，同时抑制Wnt下游靶基因c-myc和cyclinD1的表达水平，抑制肝癌细胞上皮-间质转化（EMT）以及迁移和侵袭，TSLC1与极性蛋白hScrib共同参与细胞黏附、维持上皮细胞极性；.其次，构建了Wnt信号通路调控E1A并且缺失E1A 24 bp同时携带TSLC1基因的溶瘤腺病毒载体Ad-Wnt(∆24)-TSLC1，发现其能有效抑制肝癌细胞生长，诱导肝癌细胞发生凋亡，进一步的动物实验证明TSLC1病毒能有效抑制荷瘤裸鼠肝癌的生长，并且对正常细胞的安全性较好。.此外，进行了溶瘤腺病毒Ad-Wnt(∆24)-TSLC1抑制肝癌类干细胞的研究，发现重组病毒处理后表现出明显杀伤肝癌类干细胞的作用及抑制细胞迁移与侵袭的特性，重组病毒能有效诱导肝癌类干细胞通过caspase 途径发生凋亡。因此，TSLC1有可能成为一种有效的抑制肝癌的治疗基因，构建的靶向Wnt信号的溶瘤病毒可望成为抗肝癌的治疗药物，具有一定的临床应用前景。