固有免疫模式识别受体NOD1-2异常表达在母胎界面免疫紊乱中的作用研究

免疫紊乱是原因不明性复发性自然流产（URSA）发生的重要原因。本课题组已证实URSA患者存在适应性免疫紊乱，表现封闭抗体缺乏、CD8T淋巴细胞、杀伤性NK细胞异常激活、表达抑制性KIR受体的NKreg细胞比例减少。但URSA患者固有免疫如何尚不清楚，固有免疫模式识别受体NOD蛋白位于滋养细胞，介导母胎间固有免疫，NOD1和NOD2蛋白最具代表性。在着床过程，下生殖道共生菌进入蜕膜，侵入蜕膜组织的滋养细胞可经由NOD识别母胎界面上这些异己成分，NOD与配体结合后激活IKKs,促进前炎症细胞因子及趋化因子等的转录和合成，这种适度反应有利于着床。我们提出NOD表达和功能异常则有可能导致包括妊娠失败等多种病理妊娠的发生。本项目拟从基因，细胞，分子及信号传导途径方面研究，旨在获得NOD调控母胎免疫耐受的可靠证据，证实其可能是妊娠继续与否的靶点，为寻找URSA的相应预防措施、有效治疗方法提供科学依。

免疫紊乱是原因不明性复发性自然流产（URSA）发生的重要原因。本课题组已证实URSA患者存在适应性免疫紊乱，表现封闭抗体缺乏、CD8T淋巴细胞、杀伤性NK细胞异常激活、表达抑制性KIR受体的NKreg细胞比例减少。但URSA患者固有免疫如何尚不清楚，固有免疫模式识别受体NOD蛋白位于滋养细胞，介导母胎间固有免疫，NOD1和NOD2蛋白最具代表性。本研究主要通过临床病历收集分析早期妊娠自然流产患者的超声表现与绒毛染色体核型情况；运用免疫组织化学、ELISA法、western blot、In-cell Western、RT-PCR、BrdU、Annexin Ⅴ-FITC、Transwell侵袭法等方法研究正常早孕期及URSA患者绒毛中NOD1和NOD2分布、表达、活性及信号通路；分离培养人早期妊娠蜕膜基质细胞检测接受NOD2配体处理后细胞增殖、侵袭和凋亡能力。发现绒毛染色体异常是早期自然流产的主要原因，可存活常染色体三体(21三体、18三体、13三体)、(45，x)、三倍体多发生于已有胎心的自然流产者。体外实验研究发现NODl/NOD2主要定位于绒毛滋养细胞胞质中，蜕膜组织也检测到NODl/NOD2分子的表达。在mRNA水平上，绒毛组织中NODl/NOD2的表达量高于蜕膜基质细胞(DSC)，DSC中NODI的表达量高于NOD2。雌激素、孕激素及人绒毛膜促性腺激素影响NOD1或NOD2的表达。Th1型细胞因子IL-1β、IFN-γ，可以上调了NOD1和NOD2的表达；激活NOD1和NOD2后，可以促进原代滋养细胞分泌细胞因子IL-1β、IFN-γ和TNF-α；激活NOD1和NOD2促进滋养细胞的凋亡，抑制滋养细胞的侵袭，对滋养细胞的增殖功能无明显影响。MAPK/p38通路的抑制剂能消除激活NOD1和NOD2对滋养细胞侵袭的抑制作用，同时减弱激活NOD1和NOD2对滋养细胞凋亡的诱导作用。但蜕膜基质细胞接受相应配体刺激后NOD2 mRNA及蛋白表达水平上调，抑制细胞侵袭能力促进细胞凋亡，但是对细胞增殖能力无明显影响。本研究从遗传、表达、功能及信号传导途径方面全面研究证实了固有模式识别受体NOD1/NOD2的异常表达在母胎界面免疫紊乱中的具有重要作用，获得了NOD调控母胎免疫耐受的可靠证据，证实其可能是妊娠继续与否的靶点，为寻找URSA的相应预防措施、有效治疗方法提供科学依。