母胎界面树突细胞TLRs表达及其在母胎免疫耐受中的作用研究

Our previous study and other studies found that the phenotype and function of dendritic cell changed during pregnancy. Most of them were immature and tolerant subset. But the mechanism of such change in dendritic cell is not known. Recent research implicates that，TLR in dendritic cell binding specific pathogen-assocated molecular pattern (PAMP) is a key regulator of dendritic cell immune responses, and control immune tolerance or activation. However, there is limited information on the expression of TLRs in dendritic cell in maternal fetal interface and the role of TLRs in maternal fetal immunotolerance. In this study, we seek to evaluate longitudinal TLR expression in dendritic cell at maternal fetal interface during pregnancy and nonpregnancy period, to compare the TLR expression in dendritic cell of unexplained recurrent spontaneous abortion and normal pregnancy. We will apply specific exogenous TLR ligand to activate the TLRs in dendritic cell, to find the specific TLR which can induce dendritic cell to tolerant phenotype and the TLR which can induce dendritic cell to activation phenotype, this will help to evaluate the role of different TLR of dendritic cell in maternal fetal immunotolerance and recurrent spontaneous abortion. We will apply cell coculture system, RSA animal modle, signal pathway associated methods and siRNA technology to investigate whether trophoblast cell can be recognized as a specific pathogen-assocated molecular pattern (PAMP) by TLR in dendritic cell at maternal fetal interface and induce decidual dendritic cell via TLR-MyD88/Trif-NFκB signal pathway.

妊娠后母胎界面树突细胞向免疫耐受型转化，从而在母胎免疫耐受中起重要作用，但其改变的机制尚不清楚。研究发现，树突细胞的TLRs与相应的病原相关分子模式结合可使树突细胞向不同的表型分化，从而调控免疫激活或耐受。位于母胎界面这个特殊部位的树突细胞的TLRs的表达如何？其在母胎免疫识别和耐受中的作用如何？目前尚知之甚少。本研究拟检测母胎界面树突细胞TLRs在非孕期、孕期的动态表达，以及复发性流产患者的TLRs表达有无异常。应用外源性TLR配体激活TLRs的方法，寻找母胎界面树突细胞上能够诱导免疫耐受或排斥的特异TLR，从而揭示不同TLR在母胎免疫耐受和复发性流产中的作用。应用细胞共培养、动物模型、信号通路相关研究技术以及siRNA技术，进一步探讨作为妊娠期最主要的"入侵者"滋养细胞，能否作为内源性TLR配体激活TLR，通过TLR-MyD88/TRIF-NFκB信号通路诱导树突细胞表型和功能改变

原因不明性复发性自然流产（URSA）是备受关注的生殖健康问题，发生率日益增加。目前研究提示直接与抗原接触的树突细胞可能在机体的免疫激活或耐受中起关键调控作用，但机制尚未完全阐明。而树突细胞上存在TLR，有学者指出，不同的TLR 与病原相关分子模式结合后可使树突细胞向不同的表型分化。由此我们推测，妊娠后蜕膜中树突细胞可能通过TLR 的介导，诱导树突细胞向免疫耐受型转化，明确其TLR 表达情况和效应机制对于母胎免疫耐受机制的研究具有重要意义。本研究通过检测不同妊娠状态母胎界面（即蜕膜）树突细胞TLRs 的表达情况，并探讨或其分泌的某些成分能否作为内源性TLRs 配体，激活母胎界面树突细胞TLRs，发现：（1）发现正常早孕女性及URSA患者蜕膜均以髓源性树突细胞（mDCs）为主。（2）URSA患者蜕膜树突细胞mDCs／DCs比例增高，由于mDCs可分泌IL-12，可介导Th0细胞向Th1分化，而pDCs可分化IL-10,IL-4, 使Th0向Th2分化，可见URSA患者母胎界面Th1/Th2免疫紊乱与树突细胞分型及功能异常有关。（3）URSA患者蜕膜DCs成熟型比例升高，免疫激活能力增强。（4）发现早晚孕期蜕膜DCs中TLR1-9均有不同比例表达，晚孕期蜕膜DCs中TLR2、TLR6、TLR9较早孕期表达升高，晚孕期蜕膜DCs中TLR4较早孕期表达降低。（5）比较病理性妊娠（URSA）与正常早孕女性蜕膜树突细胞TLRs，发现两组蜕膜树突细胞均有表达TLR1-9，TLR10无表达，其中TLR2、4、6、8较高表达水平，TLR5、7、9次之；而正常早孕组较URSA组蜕膜树突细胞TLR2与TLR4表达升高。（6） 建立了原代DC细胞与滋养细胞株HTR8同室共培养系统，发现成熟型DCs比例明显下降，并且TLR2与TLR4比例较共培养前升高；采用CBA法对培养上清液Th2型细胞因子进行检测，发现共培养上清液中IL-6, IL-8较单独培养组DCs上清液升高，提示滋养细胞能促进DCs向非成熟型转变，TLR2、4在其中起重要作用。（7）滋养细胞可能通过TLR-MyD88/TRIF通路诱导树突细胞向免疫耐受型转化。