miR181b靶向调控ABCC3介导非小细胞肺癌耐药机制研究

Non small cell lung cancer (NSCLC) has a high mortality. Drug resistance is the main reason for the failure of patients.It has been confirmed that the high expression of ABCC3 in NSCLC is closely related to patient's drug resistance and survival. ABCC3 is high expressed in A549/DDP, while miR181b is low expressed. Luciferase report experiments have proved that they have binding target. Thus miR181b is sepculated to regulate ABCC3 expression and effect drug resistance in NSCLC.In this project,(1)the expression of miR181b is examed in human tissue specimen and clarified their correlation with the expression of ABCC3.(2)over expression or inhibition the expression of miR181b in different drug sensitive cell lines, miR181b is confirmed to regulate the expression of ABCC3. (3) cells is treated with different drugs. Through detection ABCC3 drug pump dependent mechanism(ABCC3-ATP,the transfer substrate and intracellular chemotherapy drug concentration) and non-drug pump dependent mechanism (proliferation, apoptosis, invasion experiment), miR181b is clarified to regulate the expression of ABCC3 and affect NSCLC resistance. This project will provide new theoretical basis and molecular target for the resolution of clinical drug resistance.

非小细胞肺癌(NSCLC)死亡率高，化疗耐药是导致患者治疗失败的主要原因。我们前期工作证实ABCC3高表达与NSCLC患者耐药密切相关。A549/DDP耐药细胞系中证实ABCC3高表达，miR181b低表达，两者表达呈负相关。荧光素酶实验证实两者有靶向结合作用。由此推测miR181b通过调控ABCC3表达参与NSCLC耐药。本项目拟①用人体组织标本检测miR181b表达，明确miR181b与ABCC3表达的相关性。②在不同药物敏感细胞系进行miR181b过表达或沉默，证实miR181b转录后调控ABCC3表达作用。③化疗药物处理细胞，通过检测ABCC3药物泵依赖途径(ABCC3-ATP酶，转运底物及化疗药细胞内浓度)和非药物泵依赖途径(增殖、凋亡、侵袭实验)的改变，阐明miR181b通过靶向调控ABCC3介导NSCLC耐药的机制。本项目将为临床逆转NSCLC耐药提供新的理论依据及分子靶点。

背景：目前肺癌的发病率和死亡率一直位居全球恶性肿瘤之首，严重威胁人类健康。其中肺癌患者化疗耐药的产生是导致治疗失败、死亡率高的主要原因。但NSCLC耐药的具体机制尚未完全阐明。因此，深入研究NSCLC耐药机制是目前亟待解决的科学问题。本课题组一直致力于研究miRNA参与肿瘤耐药的机制。在前期工作中，我们证实miR-181b是参与非小细胞肺癌顺铂耐药的非常重要的一个miRNA。因此，详尽阐明肺癌细胞中miR181b介导NSCLC耐药的机制，从新的视角进一步阐释肿瘤细胞化疗耐药的发生机制，为有效防治肿瘤化疗耐药提供新思路和新靶点。.主要研究内容：我们通过人非小细胞肺癌细胞系、人肺癌组织和裸鼠接种模型，采用基因干扰、基因过表达、Real-time PCR、Western blot等手段，从分子、细胞、组织、及动物整体水平等多方面探讨miRNA在非小细胞肺癌多药耐药形成中的重要作用，明确其对肿瘤药物敏感性的调控机制。.重要结果及关键是数据：.（1）ABCC3介导的非小细胞肺癌多药耐药机制的研究。.（2）mir-181b/TGFβR1/Smad介导非小细胞肺癌耐药和转移机制的研究。.（3）mir-378/分泌型clusterin介导非小细胞肺癌耐药机制的研究。.（4）发表SCI论文。. 科学意义：本项目将为临床探索非小细胞肺癌患者多药耐药耐药机制提供新理论、新靶点。本研究从miRNA-靶基因为中心，为揭示非小细胞肺癌多药耐药发生机制奠定基础，进而为临床患者的个体化治疗提供新的思路。