肿瘤微环境中嘌呤类似物促进肿瘤侵袭的机制研究

申请人前期工作发现，ATP类似物在肿瘤微环境中很可能是一种肿瘤侵袭刺激因子。本研究将通过体外实验与临床标本检测相结合的研究思路，采用RNA干扰技术，Western blot，体外侵袭（Matrigel）实验及免疫组织化学等方法，进一步观察ATP 对不同类型人类肿瘤细胞侵袭能力的影响，确定介导ATP作用的嘌呤受体亚型及其介导的信号传导机制，研究该受体介导的肿瘤侵袭行为的机制及其与上皮-间质表型转换 (EMT) 之间的关系，寻找有效的阻断肿瘤侵袭的靶点，同时将体外研究获得的结果在临床标本上进行初步验证。本项目的完成将进一步完善肿瘤侵袭转移微环境影响的理论体系，同时对ATP 作为抗癌药物在临床应用的安全性及可靠性提供一定的客观参数。

通过本项目研究，首次证实细胞外ATP可以促进多种人肿瘤细胞系的体外侵袭能力，进一步研究其作用机制，发现ATP通过P2Y2嘌呤受体亚型激活多条信号传导通路，并引发一系列与肿瘤侵袭转移相关的基因变化。ATP通过诱导细胞发生EMT表型转换（E-cadherin 和claudin-1 表达下降，而snail 表达明显上升），增强细胞运动（表现为ATP处理后细胞片状伪足（lamellipodia）以及丝状伪足（filopodia）的数量和长度增加，与调节细胞运动密切相关的Rho蛋白家族成员Rac1和Cdc42的激活）及侵袭能力（IL-8 和 MMP-3分泌增加）。敲低P2Y2受体表达会明显抑制ATP的促侵袭作用。以上研究结果的重要意义在于，首次提出肿瘤微环境中ATP是一种重要的促侵袭因子的假说，并通过体内、体外实验予以证实。将为肿瘤转移的防治提供新靶标。