氧化固醇结合蛋白ORP8在血管壁巨噬细胞中的作用和肝脏胆固醇合成中的功能

OSBP-related protein 8(ORP8)是Oxysterol Binding Proteins(ORPs)家族的成员。我们前期工作证实，其调控肝脏X受体（LXR）和固醇调节元件蛋白（SREBP）的功能并高丰度地存在于人动脉粥样硬化（AS）斑块的CD68(+) 巨噬细胞。本研究1）将建立ORP8巨噬细胞专一过表达转基因小鼠；应用小鼠骨髓移植技术，在AS模型动物LDLr-/-小鼠体内,研究ORP8在血管壁巨噬细胞过表达对AS形成和发展的影响；2）构建ORP8腺病毒重组体，研究其在肝脏中对胆固醇合成的影响。Affy metrix芯片和酵母双杂交技术将被应用对上述实验观察进行详细机制研究。结果将丰富和验证我们的假说：OSBP蛋白家族，通过介导氧化固醇对转录调节因子LXR和SERBP的调节，影响脂质代谢和转运并参与AS的进程。

1、我们发现过表达氧化固醇结合蛋白ORP8降低血浆和肝脏胆固醇、甘油三酯和磷酯水平，相应地SREBP-1, SREBP-2与其调节的靶基因mRNA水平也明显降低。酵母双杂交发现ORP8与NUP62相互作用，荧光双分子互补、CO-IP等进一步证实了OPR8-NUP62的相互作用。ORP8通过NUP62调节SREBP的入核和相应靶基因的表达，影响细胞脂质水平，研究成果发表在2《PLOS ONE》文章。 2、在小鼠巨噬细胞中，ORP8基因沉默上调NUP62蛋白表达，改变其亚细胞定位，提升细胞的迁移能力。Exo70蛋白能够招募并结合NUP62，参与细胞的迁移。我们的实验发现，ORP8与Exo70竞争结合NUP62，减少Exo70对NUP62的招募和结合，从而影响巨噬细胞的迁移。成果发表在《Experimental Cell Research》。 3、酵母双杂交发现氧化固醇结合蛋白ORP7与GATE-16蛋白相互作用，调节细胞囊泡运输中关键蛋白GS28通过蛋白酶体途径降解。ORP7还介导了氧化固醇诱导的GS28蛋白的降解，提示ORP7作为氧化固醇受体，可能广泛参与了氧化固醇对生命活动的调节过程。成果发表在《Experimental Cell Research》。 4、证实了时钟基因Rev-erbα对小鼠As形成发展的影响。Rev-erbα提升单核细胞分化成更多的M2功能状态，该基因缺失的小鼠动脉粥样硬化斑块区域明显增大，表明Rev-erbɑ控制单核细胞的异质性分化，具有抗AS的功能。该研究成果已经投稿到《The Journal of Biological chemistry》。 5、ORP8通过结合SPAG5使肝细胞阻滞在G2/M期。同时，ORP8-SPAG5复合物还介导了氧化固醇对细胞周期的影响。研究成果已经投搞到《Experimental Cell Research》。 6、在《BiochemPharmacology》发表综述《Oxysterol-binding proteins: Functions in cell regulation beyond lipid metabolism》。7、正在进行的研究发现：肝癌中ORP8 的表达受抑制。过表达ORP8可通过内质网应激诱导肝癌细胞凋亡。q-PCR array结果显示，ORP8上调十多个促凋亡基因的表达。