RIP1/RIP3激酶依赖的程序性坏死促进急性胰腺炎重症演变及其调控机理研究

重症急性胰腺炎（SAP）是一种细胞坏死相关性疾病,目前尚乏理想的药物治疗，其死亡率较高，其重要原因是急性胰腺炎（AP）重症演变机制尚未完全阐明。新近研究表明，细胞坏死并非一种意外事件，而是由RIP1/RIP3激酶调控的程序化过程，即程序性坏死。本课题组前期发现RIP3的表达在小鼠急性坏死性胰腺炎中存在明显上调且与胰腺炎的严重程度呈正相关，而与miR223的表达呈负相关，同时RIP激酶抑制剂能够减轻实验性胰腺炎的严重程度，故推测RIP1/RIP3激酶依赖的程序性坏死可能是AP重症演变的机制之一。本研究采用体内外胰腺炎模型，探讨RIP1/RIP3激酶促进腺泡细胞坏死参与AP重症演变的作用及其调控机制，并通过免疫共沉淀等研究RIP3相互作用的蛋白或下游靶蛋白，以阐明RIP1/RIP3激酶引起腺泡细胞坏死的分子机制。以上研究结果将进一步揭示SAP的发生机制，并为SAP的治疗提供新的靶点和思路。

重症急性胰腺炎是一种细胞坏死相关性疾病,目前尚乏理想的药物治疗，其死亡率较高，其重要原因是急性胰腺炎重症演变机制尚未完全阐明。新近研究表明，细胞坏死并非一种意外事件，而是由RIP1/RIP3 激酶调控的程序化过程，即程序性坏死。我们研究发现，腺泡细胞死亡在小鼠雨蛙肽模型中以坏死为主，而在大鼠雨蛙肽模型中以凋亡为主。在大鼠雨蛙肽模型中， RIP1及RIP3存在明显的分裂；在小鼠AP模型中，RIP1的表达与腺泡细胞坏死呈反比，而与RIP3的表达则呈正比。RIP1及RIP3主要定位于坏死腺泡细胞的胞浆。RIP1和RIP3蛋白在小鼠体内AP模型中发生结合，但在体外不结合；Nec-1体内干预不能减轻雨蛙肽诱导的胰腺损伤，Nec-1或siRNA干扰RIP1亦不能抑制CCK-8或L-Arg诱导的小鼠腺泡细胞坏死。相反，siRNA干扰RIP1则加重CCK-8诱导的大鼠和小鼠腺泡细胞的坏死。而siRNA干扰RIP3表达可部分逆转CCK-8或L-Arg诱导的小鼠腺泡细胞坏死。BNip3蛋白（二聚体形式）能与RIP3蛋白发生了结合，干扰BNip3并不能抑制CCK-8诱导的RIP1和RIP3在腺泡细胞中的表达上调，但部分挽救了CCK-8诱导的腺泡细胞的坏死。以上结果显示，依赖RIP3/Bnip3的程序性坏死促进了急性胰腺炎的损伤，而RIP1则可能部分保护了胰腺炎的损伤。我们的研究结果揭示了急性胰腺炎腺泡细胞坏死发生的分子机制，将为急性胰腺炎的逆转坏死治疗手段提供了理论依据，将为急性胰腺炎的治疗开创了又一新的研究领域，同时为后续急性胰腺炎的研究提供了手段和基础。