RIP1/RIP3调控肝细胞程序性坏死在急性肝衰竭中的作用及机制研究

Despite of the high mortality of acute liver failure (ALF), the death mechanism of hepatocytes have not been fully understood, neither specific treatment is available. Massive hepatocyte death is the core in the development of ALF, but purely inhibiting the apoptosis of hepatocytes are not suffice to retard ALF progression. Recent studies showed that cellular necrosis is not an occidental event, but is a programmed process regulated RIP1/RIP3, which was named cellular necroptosis. In vitro and in vivo data of our group showed that RIP1/RIP3 interference and kinase inhibitor could alleviate hepatocytic necrosis in ALI, suggesting that necroptosis regulated by RIP1/RIP3 is among the mechanism of exacerbated ALI. Therefore, at molecular, cellular, and animal levels, this project will utilize cell line and mice model of acute liver failure to investigate the role and molecular mechanism of RIP1/RIP3 induced hepatocytic necroptosis. This study will provide new idea and target for ALF therapy, with important theoretic contribution and promising future of application.

急性肝衰竭（Acute liver failure, ALF）死亡率高，缺乏特异的治疗措施，究其原因是对肝细胞的死亡机制尚未完全阐明。研究表明大量肝细胞死亡是ALF重症进展过程中的核心环节。细胞死亡主要包括凋亡和坏死，但抑制肝细胞凋亡不足以阻止ALF的重症进展。且新近研究表明：细胞坏死并非一种意外事件，而是由RIP1/RIP3调控的程序化过程，即程序性坏死。本课题组前期体内外研究表明：采用RIP1/RIP3干扰及激酶抑制剂则减轻肝细胞坏死，故推测RIP1/RIP3调控的肝细胞程序性坏死可能是ALF重症演变的机制之一。据此，本课题拟采用细胞系及小鼠模型为载体，分别从分子、细胞及整体动物三个水平，对RIP1/RIP3调控肝细胞程序性坏死的关键分子靶点进行系统研究。通过本课题的开展，有望为临床优化ALF治疗方案提供新思路、新靶点，具有重要的理论意义和应用前景。

本研究旨在探讨程序性坏死在多器官功能障碍综合征（MODS，包括肝衰竭）中的作用及程序性坏死抑制剂（NEC-1）是否能改善MODS的多器官功能损伤。采用骨折后组织损伤并出血方法制备大鼠创伤性失血性休克模型。雌性SD大鼠被随机分配：分为假手术组、MODS组及NEC-1组。在多个时间点进行器官功能、细胞死亡方式、炎症因子的产生及程序性死亡执行蛋白等相关检测。结果显示：MODS组与假手术组相比，重要器官（肝、肺及肾）的组织损伤与功能障碍具有统计学差异（p < 0.01)。多器官组织细胞死亡方式包括程序性坏死及凋亡，其中以程序性坏死为主。程序性坏死抑制剂NEC-1可显著改善程序性坏死引起的器官组织损伤及功能障碍，同时显著降低炎症因子的释放等，从而显著降低SD大鼠72小时死亡率（p < 0.01)。因此，RIP1/RIP3调控细胞程序性坏死在创伤性休克MODS演变中发挥重要作用，有望为临床优化创伤性休克MODS治疗方案提供新思路、新靶点，具有重要的理论意义和应用前景。