lncRNA-MALAT1靶向ANKHD1调控Hippo信号通路影响大肠癌放射敏感性的机制研究

Radioresistance has important impact on the comprehensive treatment of colon cancer, and lncRNA can regulate tumor radiosensitivity. Using RNA sequencing method, our team firstly selected lncRNA-MALAT1 with the function of radiation inducement of colon cancer cells, and also, lncRNA-MALAT1 was highly expressed in CAFs of colon cancer than in NF. Then we verified its vital function on radioresistance of colon cancer cells. Proteomics reveals that ANKHD1, a pivotal component of Hippo signaling pathway,was targeted by lncRNA-MALAT1. So, We make a hypothesis based on previous literature and pilot experiments here: lncRNA-MALAT1 in colon cancer cells or tumor microenvironment can influence radiosensitivity of colon cancer cells by targeting ANKHD1 to regulate Hippo signaling pathway. We are planning to utilize RNA interference, gene report and RNA immune coprecipitation technology etc. to illustrate molecular mechanism of how lncRNA-MALAT1 regulating radiosensitivity of colon cancer cells from tissue, cell, molecular, and animal level in intracellular and extracellular. This project may provide new insights and target point for strengthening radiosensitivity among colon cancer patients.

业已证明：放射抵抗对直肠癌放疗疗效有重要影响，而lncRNA可调控肿瘤放射敏感性。本课题组前期通过二代测序筛选到大肠癌细胞中具有辐射诱导作用的lncRNA-MALAT1，它在大肠癌微环境的成纤维细胞中也呈高表达状态；经验证其对大肠癌细胞放射抵抗发挥重要作用；蛋白组学研究则发现Hippo信号通路的关键组分ANKHD1是其效应靶点。基于以上前期研究结果，本课题组提出以下科学假设：大肠癌及其微环境细胞中的lncRNAMALAT1可于胞内、外双重途径、通过ANKHD1调控Hippo信号通路，并最终影响大肠癌放射敏感性。本课题组拟通过RNA干扰、报告基因、RNA 蛋白质免疫共沉淀等技术，以期在分子、细胞及动物水平阐明大肠癌及其微环境细胞中lncRNA-MALAT1调控大肠癌放射敏感性的分子机制，为大肠癌放射增敏提供新的靶点和路径。

放疗敏感性对肿瘤的放射治疗具有重要作用，LncRNA可以调控肿瘤的放射敏感性，本课题探究了LncRNA MALAT1对结直肠癌放射敏感性的影响，研究发现结直肠癌细胞中沉默LncRNA MALAT1的表达会促进结直肠癌细胞的放射敏感性。另外我们通过 iTRAQ 蛋白组学技术筛选了干扰 MALAT1表达后大肠癌细胞中差异表达的基因，发现 lncRNA-MALAT1可靶向作用ANKHD1，进一步我们探究了ANKHD1对结直肠癌的发生发展及肿瘤放射敏感性的影响。我们通过体内体外实验检测了ANKHD1在结直肠癌中的表达情况，研究发现ANKHD1的表达与肿瘤的发生发展呈正相关，并对ANKHD1促进肿瘤发生发展的机制进行了初步探究。进一步研究显示，结直肠癌细胞中ANKHD1沉默会通过促进氧自由基ROS的产生，促进DNA双链断裂而增加结直肠癌细胞的放射敏感性。通过RIP实验我们进一步验证了ANKHD1与LncRNA MALAT1间的相互作用。ANKHD1为最新发现的 Hippo 信号通路复合物的关键组成部分，对 Hippo 信号通路下游关键分子 YAP1具有正向调控作用。我们探究了Hippo 信号通路下游关键分子 YAP1在MALAT1/ANKHD1调节结直肠癌放射敏感性中的作用。研究发现，结直肠癌中MALAT1/ANKHD1沉默会抑制YAP1的激活，从而影响Hippo 信号通路对肿瘤发生发展及放射敏感性的影响。综合上述结果，本课题研究探讨了LncRNA MALAT1/ANKHD1/YAP1轴在结直肠癌发生发展及对辐射敏感性中的作用，为研究结直肠癌的发生发展做出了一定的工作，以及为提高结直肠癌的放射治疗敏感性提供了新的思路。项目资助发表SCI论文5篇，待发表SCI论文1篇。培养硕士研究生6名，博士研究生4名，其中6名硕士研究生已经取得硕士学位，3名博士研究生取得博士学位，1名博士研究生在读。项目投入经费58万元，支出53.172708万元，各项支出基本与预算相符。剩余经费4.827292万元，剩余经费计划用于本项目研究的后续支出。